Encuesta serológica de la infección con neumovirus en granjas avícolas comerciales en Arabia Saudita

El metapneumovirus aviar (AMPV), anteriormente llamado pneumovirus aviar (APV, por sus siglas en inglés) (N. del T. en castellano comúnmente se denomina neumovirus aviar) es el agente causal de la rinotraqueítis del pavo (TRT) y del síndrome de cabeza hinchada (SHS) en pavos y pollos, respectivamente (Buys et al., 1989). Este virus pertenece a la familia Paramyxoviridae que incluye dos subfamilias (la Paramyxovirinae y la Pneumovirinae (Regenmortel et al., 2000). El primer aislamiento de neumovirus aviar ocurrió en Sudáfrica en 1979 (Buys et al., 1989) y después se le detectó en otros países del mundo (Alexander, 1997). Se ha identificado un serotipo de neumovirus aviar, dentro del cual se han designado tres subgrupos (A, B y C) con base en sus diferencias moleculares y antigénicas (Cook et al., 1999; Harlow y Lane, 1988; Seal, 2000).

Se sabe que los pavos y los pollos de cualquier edad son hospederos naturales del neumovirus aviar, causando enfermedades respiratorias en aves jóvenes y bajas en la producción de huevo en las parvadas de reproductoras (Alexander, 1997; Cook et al., 1999; Jones et al., 1988). Aun cuando los pavos de todas las edades son susceptibles al neumovirus aviar, la severidad de la enfermedad es variable. Alexander (1997) informó que la enfermedad fue más severa en pavipollos de un día que en pavos de 6 semanas de edad. La enfermedad clínica se caracteriza por descarga nasal y ocular, inflamación de los senos infraorbitarios y estornudo (Jones et al., 1986; McDougall y Cook, 1986, Wyeth et al., 1986). Estos signos clínicos se han observado en diferentes países, en los que la enfermedad ha recibido diferentes nombres, aunque similares, lo cual refleja la complejidad de la etiología, en presencia de infecciones secundarias. Las pruebas serológicas como el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) y la prueba de virus- neutralización (VN) son los métodos que se emplean más comúnmente para el diagnóstico de la infección con neumovirus aviar. La prueba de virus-neutralización se realiza utilizando diversos sistemas, incluyendo cultivos de órgano traqueal (TOC), fibroblastos de embrión de pollo (CEF) o células. Aun cuando las pruebas de ELISA y virus-neutralización tienen sensibilidad similar (Cook et al., 1999), la prueba de ELISA es la más popular (Chettle y Wyeth, 1988; Eterradossi et al., 1995, O'Loan et al., 1989). En virtud de lo anterior, realizamos una encuesta serológica para detectar anticuerpos contra el neumovirus aviar (APV) en granjas avícolas comerciales de Arabia Saudita, utilizando las pruebas de ELISA y virus-neutralización.

Material y Métodos

Muestras
Se recolectaron 87 muestras de suero de diferentes granjas avícolas comerciales en el área de Qassium, Arabia Saudita, en el período de 2007 a 2008. Las aves donadoras de las muestras presentaban síntomas respiratorios y el rango de edades fue de un día a 62 semanas.

Preparación del Antígeno para ELISA
La preparación del antígeno para la prueba de ELISA fue similar a la descrita por Chettle y Wyeth (1988), con algunas modificaciones. En pocas palabras, se tomó el sobrenadante de células Vero infectadas y se centrifugó a 100,000x g durante tres horas, a 4°C (ultracentrífuga Beckman L7-55, rotor SW 41, Palo Alto, CA, EE.UU.). El sedimento se resuspendió en solución salina fosfatada amortiguada (PBS) (pH 7.2) y se colocó en un gradiente de sucrosa (35 y 55%) y se centrifugó a 100,000x g durante tres horas a 4ºC. El virus se cosechó de la interfase de sucrosa y se diluyó con PBS (pH 7.2) y se centrifugó a 100,000x g por tres horas a 4ºC. La concentración de la proteína viral se determinó mediante electrofotometría a longitudes de onda de 260 y 280 nm (Harlow y Lane, 1988). Un testigo negativo de células Vero se trató de la misma manera indicada ya. Los procedimientos de ELISA se realizaron según la descripción de O'Loan et al. (1989). Se prepararon sueros testigos positivos en pavos libres de patógenos específicos (SPF) que se inocularon con el virus inactivado.

Prueba de Virus-Neutralización (VN)
El procedimiento para la prueba de virus-neutralización descrito por O'Loan et al. (1989) se utilizó, con algunas modificaciones, de la siguiente manera: Las muestras de suero se sometieron a diluciones dobles seriadas en un medio para cultivo de tejidos libre de suero (MEM) comenzando con 1:10 y hasta 1:1,280. Se agregó un volumen de 50 ml que contenía 100 dosis infectantes para el cultivo de tejidos 50% (DICT50) de neumovirus aviar (Minnesota/turkey/2a/97) en un volumen igual a cada dilución del suero, contenido en placas estériles de fondo plano de 96 concavidades (Corning Incorporated, Corning, NY, EE.UU.). Se transfirió un volumen de 50 ml de la mezcla virus-suero de cada dilución y por duplicado a monoestratos de células Vero contenidas en placas de fondo plano de 96 concavidades. Las células se incubaron a 37ºC durante 5 a 6 días y se revisaron cada día en busca del efecto citopático (CPE), consistente en la formación de grande sincicios y células redondeadas.

Se sabe que los pavos y los pollos de cualquier edad son hospederos naturales del neumovirus aviar, el cual causa enfermedades respiratorias en las aves jóvenes y caídas en la producción de huevo en las parvadas de reproductoras (Alexander, 1997; Cook et al., 1999; Jones et al., 1988). Aun cuando los pavos de todas las edades son susceptibles al virus, la severidad de la enfermedad es variable. Las más utilizadas para el diagnóstico son las pruebas serológicas de ELISA y virus-neutralización. Baxter-Jones et al. (1989) informaron sobre la detección de anticuerpos específicos cinco días después de haber aparecido los signos clínicos, utilizando la prueba de virus-neutralización en fibroblastos de embrión de pollo, pero el título de anticuerpos se redujo posteriormente, hacia los 13 días después de la aparición de los signos clínicos.

En el presente estudio, los resultados de la encuesta serológica sobre neumovirus aviar en granjas avícolas comerciales de diferentes edades, utilizando las pruebas de ELISA y virus-neutralización se resumen en el Cuadro 1. Se observó la detección de anticuerpos en el 50% (8/16) de las muestras de suero analizada mediante ELISA y virus-neutralización, recolectadas en pollos de 11 a 18 semanas de edad. No se detectaron anticuerpos en aves más jóvenes ni de mayor edad. Este resultado discrepa del reportado por Alexander (1997), quien encontró mayor severidad de la enfermedad en pollos de un día que en los de 6 semanas de edad.

El presente estudio indica la presencia de anticuerpos específicos contra el neumovirus aviar en granjas avícolas comerciales de Arabia Saudita, de 11 a 18 semanas de edad.

Cuadro 1: Encuesta serológica sobre neumovirus aviar (APV) en muestras de suero recolectadas en granjas comerciales de Arabia Saudita utilizando las pruebas de virus-neutralización (VN) y ELISA

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