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Autor: Dr. Abel Ciprian Carrasco - Dra. Susana Mendoza Elvira
Fecha de Publicación:
I.
ANTECEDENTES
El cerdo con la excepción de las aves, es la única especie que ha sido objeto
de transformaciones biológicas, resultado de los avances en la ingeniería genética
y en la medicina veterinaria, y a pesar de que los parámetros como el tiempo de
gestación no han podido alterarse. El cerdo ofrece ventajas comparado con el bovino
de engorda, por ejemplo el período de engorda y el peso al mercado: los cerdos
son sacrificados con un peso promedio de 100 kg entre los 4.5 y 6 meses de edad,
mientras que los vacunos requieren entre 28 y 30 meses para alcanzar los 400 kg
requeridos para el mercado. Respecto al rendimiento en canal, para el cerdo este
parámetro es del casi 100%, el mas alto de las especies ganaderas.
La clave en el éxito de la porcicultura moderna radica en aumentar los índices
de ganancia diaria de peso (GDP) y disminuir la conversión alimenticia (CA). Estos
parámetros se observan seriamente afectados por las enfermedades crónicas especialmente
las NEUMÓNICAS. En este aspecto las neumonías juegan un papel importante, debido
al tipo de explotación intensiva que es sometido el ganado porcino.
II. INTRODUCCIÓN
La leche esta disponible en las glándulas mamarias desde el inicio del parto y
así cada lechón puede hacer su camino directamente a la mama, encontrar el pezón
y mamar. La pauta de lactancia en el cerdo y la interrelación entre la cerda y
lechón, son particularmente fascinantes.
La primera leche, no es meramente la única fuerza de vida conteniendo alimentos
para el lechón ya que, incluso, contiene un alto nivel de anticuerpos o inmunoglobulinas
(principalmente la IgG y en menor grado la IgM y la IgA). Estos y otras macromoléculas
son capaces, en las primeras pocas horas de vida, de evitar la digestión y pasar
intactos através de la pared intestinal, para procurar un grado de inmunidad frente
a las enfermedades producidas por numerosos microorganismos patógenos que acechan
a los lechones en las primeras semanas de vida, esto es de suma importancia ya
que los lechones nacen desprovistos de la inmunidad pasiva natural debido a el
tipo de placentación epitelio - corial, debido a que tiene 6 capas de tejido entre
la sangre fetal y la sangre materna. Otro tipo de anticuerpos (IgA secretora)
es secretado continuamente con la leche durante toda la lactancia, estos no son
absorbidos, pero actúan en los intestinos del lechón como defensa contra infecciones
bacterianas de los mismos.
III. INMUNIDAD NEONATAL
La inmunidad de la marrana la transfiere a sus lechones a través del calostro
y la leche. El calostro es el alimento que ingieren los lechones durante las primeras
24 a 36 horas de nacidos y ayudan a proteger a los lechones en las primeras semanas
de vida mientras desarrollan su propia respuesta inmune. El calostro esta compuesto
de anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig´s): del 68 al 87% es IgG; del 8 al 22% de
IgA y del 5 al 9% de IgM. El intestino del lechón durante las primeras horas de
haber nacido, tiene un epitelio de absorción con células fetales altamente pinocíticas
y que son las que transportan a las Ig´s del intestino a la circulación sanguinea.
Posteriormente (de las 36 horas), las células fetales empiezan a ser reemplazadas
por células epiteliales y ya no permiten el paso de los anticuerpos intactos a
la sangre.
La IgA se incrementa en la leche después de parto. La absorción de la IgA y de
la IgM no están eficiente como la IgG, sin embargo, in situ en la mucosa provee
buena protección. La concentración de las inmunoglobulinas empieza a declinar
a una relación del 3.4%/h. durante las primeras 24 horas después del parto. La
vida media de las Ig´s en los lechones es variable: la IgG va de 6.5 a 22 días;
la IgM de 2.5 a 3 días y la IgA de 2 a 3 días. Entre la 3ª. y 4ª. semana de edad,
en el lechón se encuentra la mínima concentración de Ig´s, ya que fueron degradadas
y ya se inicia la síntesis de las Ig´s propias del lechón. Aproximadamente, después
de 7 a 10 días de la primera exposición a cualquier patógeno, los lechones neonatos
inician una primera respuesta inmune.
Además de la interferencia humana, la cerda y el lechón iniciaran su compañía
algún tiempo después. Debido a que los cerdos no pueden ser seleccionados mientras
están lactando, la eficacia de la producción necesita de un destete precoz, debido
a esto y a que los lechones pueden ser destetados a cualquier edad, aunque es
mas frecuentemente entre las 3 y 5 semanas. La edad del destete depende mucho
de la sofisticación de la dieta, alojamiento, control de las enfermedades y adecuación
del manejo utilizado. La eliminación en el nacimiento o antes (por histerectomía),
es utilizada para producir unos valores base para libres de patógenos específicos
(S.P.F.); lotes mínimamente enfermos, que han de ser por garantía cerdos libres
de patógenos específicos, de los que el lechón normalmente, se contagiara tan
pronto como fuera expuesto al medio ambiente natural; por ejemplo, los microorganismos
asociados a trastornos crónicos pulmonares.
El destete es mucho menos traumático para la madre que para el lechón; el lechón
lactante tiene un pequeño problema en reabsorber la leche deglutida. Cuando el
lechón es separado de la madre, la regresión glandular empezara casi inmediatamente
y estará terminada, esencialmente, tres días después del destete. Esto en conjunto,
no es sorprendente, que a mitad del primer día el tejido mamario tendrá registrado
un equivalente a 12 pérdidas mamarias (de leche). No se precisa mas, que rápidamente,
un destete brusco, sin necesidad de retirar también el alimento o el agua de bebida
de la madre en ese momento. Es mas fácil que existan problemas en el estado del
aparato reproductor materno después de un destete precoz.
Los órganos necesitan una recuperación después del esfuerzo que representa el
parto y la crianza; la lactancia ayuda en este proceso; y en cualquier caso es
incompleto hasta tres semanas después del parto. Como la lactancia esta preparada
para ser progresivamente menor, a las tres semanas el útero es correspondientemente
menos receptivo a la implantación del embrión y existe una aumentada probabilidad
de retardar el celo y reducir el tamaño de la camada.
Aunque algunos porcicultores pueden tener éxito en el destete precoz, como de
tres semanas para un período limitado de tiempo, solo algunas excepciones en unidades
o lotes, pueden hacerlo durante un número consecutivo de años. Como observación
general, es difícil encontrar evidencias de cualquier mejoramiento real en el
número de lechones producidos, por hembra reproductora y año, en un destete mucho
menor a 25 días de edad o 5 kg. de peso vivo.
V. SALUD DEL HATO
Algunas enfermedades como la disentería porcina y la Gasteroenteritis transmisible
son desastrosas mientras estén activas. Pero otras como las neumonías y la rinitis
atrófica, pueden fijarse en una explotación para causar una continua e insidiosa
pérdida de las ganancias. Las enfermedades mas comunes y que mas gastos erogan
de las explotaciones porcinas son las que afectan al aparato respiratorio y al
sistema nervioso.
Las enfermedades respiratorias del cerdo, hoy en día están consideradas como uno
de los problemas de salud animal mas importantes en la producción porcina (Amass,
1998; Loeffen, 1999). En neumonía enzoótica (NE) Mycoplasma hyopneumoniae es considerado
como el agente bacteriano primario más importante (Piffer y Ross, 1984; Ross,
1999) seguido de Actinobacillus pleuropneumoniae que causa pleuroneumonía contagiosa
porcina (Sebunya y Saunders, 1983; Ciprián et al., 1988).
El agente secundario que con mayor frecuencia se aisla es Pasteurella multocida
una vez que las defensas de pulmón han sido alteradas, agravándose el problema
en una pasteurelosis pulmonar (PP) (Morrison et al., 1985). La interacción entre
M. hyopneumoniae y P. multocida después de una infección secuencial ya ha sido
demostrado (Smith et al., 1973; Ciprián et al., 1988; Amass, 1994).
El caso ideal seria tener una explotación completamente libre de todas las enfermedades.
La estrategia a tomar va a depender del ó de los problemas existentes en cada
granja y de tener un diagnóstico anatomopatológico, serológico y microbiológico
completo y veraz. La vacunación de las madres, en forma ideal preveniría la colonización
totalmente, ó puede reducir la colonización específica virulenta, pero puede ser
contraproducente.
En general la vacunación en los lechones solo funciona en colonizadores tardíos
como los micoplasmas (¿tardios?) o puede interferir con la inmunidad materna (como
en Pleuroneumonía Contagiosa Porcina). Hay casos en el sistema de destete precoz
separado (SEW) donde no se elimina el Mycoplasma hyopneumoniae y se presentan
problemas de neumonía enzootica alrededor de las 20 semanas de edad y esto es
debido a una colonización tardía (Whittemore, 1988; Amass, 1998; Ciprián, 1999).
En granjas de 3 sitios el punto de ataque principal son las madres, mientras que
en granjas que no tienen los 3 sitios el punto de ataque primordialmente son los
lechones.
Como podemos darnos cuenta el llevar a cabo un destete precoz separado (SEW),
sin tomar las precauciones de manejo e instalaciones, así como la capacitación
adecuada al personal nos puede causar mas problemas que beneficios, debido a un
sin número de agentes que anteriormente eran denominados como patógenos de baja
incidencia y que están o ya tomaron importancia como agentes causales de enfermedad,
así como sus posibles interacciones o sinergias y los efectos que estos causen
por un inadecuado manejo y que permita la entrada de agentes secundarios los cuales
van a causar mas perdidas de producción y por lo tanto perdidas económicas.
Por lo que hoy mas que nunca, el diagnóstico integral certero y veraz toma un
papel de suma importancia en la producción porcina. En la actualidad se ha puesto
de moda hablar de agentes colonizadores tempranos o tardíos, esto dependiendo
de si ellos son capaces de estar infectando la mucosa del aparato respiratorio
en alguna de sus porciones, en los primeros 15 días de vida o posteriores a los
15 días de vida de los lechones.
Existen un sin número de trabajos sobre el efecto de la edad del destete, para
remover los patógenos de la granja. Sin embargo, cada MVZ, responsable de cada
granja se preguntaría: ¿A que edad tendría que destetar para eliminar tal o cual
enfermedad? (Amass, 1998).
No existe una edad universal de destete para eliminar un patógeno en especial,
de ahí que sea indispensable conocer él o los patógenos específicos que afectan
a la granja, para estimar la edad del destete y así poder eliminarlos:
PROBABLE EDAD DE DESTETE PARA ELIMINAR
LOS PRINCIPALES PATOGENOS RESPIRATORIOS.
|
MICROORGANISMO
|
PROBABLE EDAD DE DESTETE
|
Actinobacillus
pleuropneumoniae
Biovariedad 1, NAD dependiente |
a) A 10 días o menores:
si el hato tiene baja o variable inmunidad: eliminado en todos los casos
hasta en un 90%.
b) A 16 días: oportunidad de eliminación del 50%.
c) De 18 a 20 días: oportunidad de eliminación del 5%. Será necesario tener
una inmunidad de hato alta. |
| Mycoplasma hyopneumoniae
|
A 17 días |
| Haemophilus parasuis |
A < 7 días |
| Pasteurella multocida |
A < 7 días |
| Actinobacillus suis |
A < 2 días |
| Streptococcus suis |
Solo con cesarea |
Modificado Amass, 1998.
VI. EL COMPLEJO RESPIRATORIO PORCINO
Las enfermedades vírales son importantes en las infecciones secundarias bacterianas,
sobretodo en las involucradas con el aparato respiratorio; tales afecciones están
bien documentadas tanto en el hombre como en los animales domésticos. La idea
de que pudiera existir una cooperación entre virus y bacterias en las neumonías
fue conceptuada a raíz de las pandemias de influenza humana, ocurridas durante
el siglo pasado. Aún hoy en día, la neumonía por agentes bacterianos secundarios
es una de las complicaciones en los procesos neumónicos del cerdo.
El problema respiratorio porcino, hoy en día se le conoce como el Complejo Respiratorio
Porcino (CRP), y se le considera así, por la gran variedad de agentes infecciosos
que se involucran en el proceso neumónico. Sin embargo, existen una serie de trabajos
clásicos, realizados por nuestro grupo que han demostrado la participación de
virus con virus, de virus con bacterias, de micoplasmas con bacterias y de bacterias
con bacterias, en donde actúan en forma sinérgica o interactuan en ellos. De igual
manera sabemos que existen agentes patógenos primarios (agentes colonizadores
tempranos) y secundarios u oportunistas (agentes colonizadores tardios), de reciente
aparición, por los sistemas de producción porcina (cerdos en explotaciones de
alta salud en varios sitios) que han complicado el problema neumónico aparentemente
resuelto (en cerdos de explotaciones convencionales), de ahí la necesidad de seguir
trabajando en las interacciones o sinergias entre diversos agentes infecciosos
(Amass, 1998; Ciprián, 1999).
VII. FENÓMENOS DE INTERACCIONES Y SINERGIAS
ENTRE VIRUS Y BACTERIAS
La primera comprobación de una bacteria, que per se no provoca daño alguno y que
interactua con un virus en el proceso neumónico del cerdo fue realizado en la
FFES-Cuautitlán UNAM, donde se demostró una marcada sinergía entre el virus vacunal
de la Fiebre Porcina Clásica (antes Cólera Porcino) y Pasteurella multocida (Pijoan
y Ochoa 1978; Pijoan et al., 1980).
A partir de este hallazgo, hemos venido realizando y comprobando desde hace mas
de 15 años, la acción de patógenos primarios y la invasión de agentes oportunistas
en el fenómeno de interacción y sinergia que ocurre entre virus y bacterias y
bacterias con bacterias en el Complejo Respiratorio Porcino, lo que ha permitido
entender mejor el problema, y así dar soluciones a la industria porcina.
1. Fiebre Porcina Clásica Actinobacillus pleuropneumoniae.- Hemos encontrado por
evidencias clínicas y aislamiento de la bacteria, que la PCP se exacerba cuando
se importan cerdas de reemplazo de EU, y que vienen como portadores de Actinobacillus
pleuropneumoniae, pero libres de Fiebre Porcina Clásica (FPC), y ya en destino
final que es la granja , cuando se vacunaron contra la FPC, ocurrieron brotes
de PCP agudo, en donde el serotipo de Actinobacillus pleuropneumoniae predominante
fue el 1 (datos no publicados 1998).
2. Virus de la Enfermedad de Aujeszky (VEA) - Pasteurella multocida. - En un estudio
de rastro, de los casos neumónicos en un 67% se observó serología positiva al
VEA, mientras que en los casos normales sólo en un 32%. De los pulmones neumónicos,
en un 51% se aisló algún tipo de Pasteurella; de los normales solo en un 9%. Con
base en estos trabajos se desarrolló un experimento con cerdos convencionales,
previamente vacunados con una cepa inactivada del virus de la enfermedad de Aujeszky,
considerando como parámetro principal la remoción pulmonar de P. multocida a diferentes
días posdesafío con una cepa virulenta del virus de la enfermedad de Aujeszky.
Se encontró que el virus afecta la remoción pulmonar de la bacteria a partir del
día 7 al 15 posinfección. Estos resultados apoyaron la hipótesis de que el virus
de la enfermedad de Aujeszky está involucrado como agente primario en la pasteurelosis
pulmonar del cerdo (Badiola y Pujols, 1984; Caballero, 1885).
3. Virus de la Enfermedad de Aujeszky (VEA) - Actinobacillus pleuropneumoniae.-
También hemos demostrado que el VEA interactua con la PCP. Las evidencias encontradas
muestran que la vacunación contra el VEA no fue capaz de prevenir la multiplicación
del virus en el tracto respiratorio, ya que una dosis mínima de Actinobacillus
pleuropneumoniae serotipo 1 fue suficiente para colonizar y matar a todos los
cerdos del experimento, por lo que consideramos que existió una sinergia entre
el VEA y el actinobacilo. Probablemente este sucediendo lo mismo en el campo,
dado que después de presentarse la enfermedad de Aujeszky, aparece la PCP en forma
epizoótica (Falcón et al., 1987; Tenorio et al., 1987)
4. Virus del Paramyxovirus porcino - Actinobacillus pleuropneumoniae.- Por otro
lado, no se pudo demostrar la interacción o sinergía entre el virus del Paramyxovirus
porcino y Pasteurella multocida, así como con Actinobacillus pleuropneumoniae
serotipo 1, en cerdos convencionales y en condiciones controladas (García et al.,
1988; Torres et al., 1996).
VIII. FENÓMENOS DE INTERACCIONES Y SINERGIAS
ENTRE BACTERIAS Y BACTERIAS
5. Mycoplasma hyopneumoniae y Pasteurella multocida : Infección experimental de
cerdos convencionales.- En esta investigación realizada por nuestro grupo se valoró
esta infección de la siguiente manera : Se formaron cuatro grupos de cuatro cerdos
cada uno: I testigo, II inoculado solamente con M. hyopneumoniae, III inoculado
solamente con P. multocida y IV inoculado primero con M. hyopneumoniae y después
con P. multocida. En los cerdos del grupo IV inoculado con ambos agentes se agravó
y se prolongó la hipertermia, presentaron tos y disnea de mayor severidad y con
signos de agravamiento, las lesiones macroscópicas abarcaron del 22 al 26% y fueron
de tipo exudativo, se recuperó M. hyopneumoniae de todos los pulmones y solo se
recuperó en tres animales P. multocida, 13 días después de inoculada, cuyos pulmones
estaban previamente infectados con el micoplasma y no fueron capaces de eliminar
a Pasteurella. Los grupos mostraron índices de crecimiento similares en la ganancia
diaria de peso, sin embargo en el grupo inoculado con ambos agentes el consumo
de alimento fue mayor (Ciprián et al., 1988).
6. Haemophilus parasuis - Mycoplasma hyopneumoniae - Mycoplasma hyorhinis : Infección
experimental de cerdos convencionales.-En cuanto a la interacción entre Mycoplasma
hyopneumoniae y/o Mycoplasma hyorhinis y/o Haemophilus parasuis el grupo también
realizó un estudio en cerdos convencionales, en donde se utilizaron lechones procedentes
de una granja seronegativa a PRRSv, VEA, Enfermedad del Paramyxovirus porcino,
Actinobacillus pleuropneumoniae, Mycoplasma hyopneumoniae y Haemophilus parasuis.
Las lesiones encontradas a la necropsia fueron recopiladas para la realización
de la planimetría (Ciprián et al., 1988). Por los datos obtenidos en este experimento
en el que se determinó el grado de lesión pulmonar, análisis de los signos clínicos,
lesiones macroscópicas, lesiones microscópicas, recuperación de los agentes inoculados,
serología, las conclusiones sugieren altamente una interacción entre Mycoplasma
hyorhinis y Haemophilus parasuis y no asi, con Mycoplasma hyopneumoniae y Haemophilus
parasuis (Lara et al., 1996 a; Lara et al., 1996 b)
IX. AGENTES INFECCIOSOS DE RECIENTE APARICIÓN
EN EL COMPLEJO RESPIRATORIO PORCINO
PRRSv - Streptococcus suis, Haemophilus parasuis y Pasteurella multocida.-
También otros grupos de investigación han trabajado en las diferentes interacciones
y sinergias que se pueden presentar entre estos agentes, demostrando así que existe
una interacción entre el virus de PRRSv y el Streptococcus suis, en donde en contraste
con la interacción producida entre el Virus de la Enfermedad de Aujeszky, en el
vPRRS, se observa una activación posfagocitica del macrófago por el PRRSv (Galina,
et al., 1994 a; Galina et al., 1994 b).
Esto sugiere que el mecanismo de acción de este virus no es sobre células fagocíticas.
Se debe a la destrucción del epitelio nasotraqueal, con la consiguiente respuesta
inflamatoria y la migración de células fagocíticas al sitio. Esto resulta en la
diseminación del Streptococcus suis, ya que se demostró que las cepas virulentas
del Streptococcus suis pueden sobrevivir dentro de los macrófagos. Esta falta
de inmunosupresión local aunada a una intensa inmunoestimulación sistémica, puede
explicar en parte el por que no se ha podido demostrar la interacción in vivo
entre PRRSv y Haemophilus parasuis y PRRSv y Pasteurella multocida.
Al igual que en Streptococcus suis la infección de macrófagos por PRRSv resulta
en un aumento de su capacidad de digestión de Haemophilus parasuis fagocitados,
resultando en una reducción de lesiones de poliserositis en animales previamente
infectados con PRRSv (Galina, et al., 1994 a; Galina et al., 1994 b; Solano, et
al., 1997).
X. IMPACTO DEL DIAGNOSTICO EN EL CONTROL
DE LAS NEUMONIAS
Como hemos podido darnos cuenta la situación del Complejo Respiratorio Porcino
en explotaciones con destete convencional es bastante compleja y esto se incrementa
en aquellas explotaciones en las que se maneja el destete precoz separado (SEW)
o el destete precoz medicado (MEW) ambas prácticas que van adquiriendo popularidad
en nuestro país, razón por la cual debemos de tener claramente entendidos los
problemas neumónicos con un buen diagnóstico, para tomar las medidas de prevención,
y en el mejor de los casos determinar un buen tratamiento con medidas de manejo
adecuadas, y así controlar y posiblemente eliminar el problema de nuestra explotación,
por lo que es sumamente importante entender como y porque en las diversas granjas,
los diferentes agentes infecciosos (tempranos y tardios) están interrelacionando
entre ellos.
En un detete precoz separado SEW o en un destete precoz medicado MEW practicado
a 10 días o menores, el hato con una baja o variable inmunidad, la eliminación
de la PCP será en algunos casos hasta en un 90%. ¿y como saber el status inmune?,
para esto, se tendrán que realizar estudios serológicos y microbiológicos de tipo
horizontal y estratificado en la granja.
En un detete precoz separado SEW o en un destete precoz medicado MEW practicado
a 16 días, la oportunidad de eliminacion de la PCP será del 50%. ¿Y como saber
el status inmune?, para esto, se tendrán también que realizar estudios serológicos
y microbiológicos de tipo horizontal y estratificado en la granja.
En un destete convencional, por mucho que se practique a los 18 a 20 días, la
oportunidad de eliminación en el caso de la PCP sería del 5%. Aquí el diagnóstico
serológico y microbiológico es valioso solo para determinar el status inmune de
la granja, de ahí que sea necesario tener una inmunidad de hato alta con vacunación.
La forma de controlar la PCP, la neumonía enzootica, pasteurelosis pulmonar o
enfermedad de Glasser u otras es por medio del diagnóstico serológico y microbiológico,
este sistema de diagnóstico detecta una respuesta inmunológica de los cerdos que
han estado con una infección pasada (Whittemore, 1988; Amass, 1998).
En el caso de la Pleuroneumonía Contagiosa Porcina, esta no afecta por si sola
una explotación porcina, el solo diagnóstico serológico/ microbiológico de ella
sola no es suficiente, las otras enfermedades como Fiebre Porcina Clásica; Enfermedad
de Aujeszky; PRRSv; Neumonia Enzoótica y Enfermedad de Glasser contribuyen y complican
el control y/o erradicación de la PCP, lo mismo esta sucediendo con otros agentes
infecciosos, ya sean primarios o secundarios (Ciprián, 1999).
Dentro de las principales enfermedades infecciosas que afectan a los cerdos, las
afecciones respiratorias son las que causan mayor impacto y mayor dificultad para
controlarlas y/o erradicarlas, a continuación se describen las características
de los principales patógenos respiratorios:
|
Microorganismo
|
Edad inicial De detección
|
Duracion de la Inmunidad
materna calostral (si/no: la inmunidad es protectiva)
|
Edad cuando los signos
clínicos son observados
|
Incu bación
|
Reser- vorios
|
Forma de transmisión
|
Actinobacillus pleuro pneumoniae
Biovariedad 1, NAD dependiente |
<11 días |
Con ELISA: 28 a 30 días
Con neutralización de hemolisina/ F.C.: 20 a 21 días
Con aglutinación: 20 a 26 días.
(Si: probablemente no contra todos los serotipos) |
Todas las edades en general:
crecimiento/ finalización |
Hs. variable |
Moscas
Pajaros
Roedores |
Aerosoles
Contacto directo |
| Mycoplasma hyo pneumoniae
|
14 días |
4 semanas (2 semanas) |
6 semanas o mas.
Gral. 3 a 6 meses de edad |
10 a 16 días |
|
Contacto directo
Aerosoles |
| Haemophilus parasuis |
7 días |
2 a 4 semanas (si) |
2 semanas a 4 meses |
|
|
Contacto directo Aerosoles
Heces fecales |
| Pasteurella multocida |
20 días
21 días
7 a 10 |
(Probable mente) |
Variable: dependiendo de
la afección |
Va riable |
Conejos, perros, gatos,
bovinos, aves, pavos, cabras, ovejas |
Contacto directo
Aerosoles |
| Actino bacillussuis |
2 días |
???????? |
Todas las edades. Gral.
Lactancia y recien destetados |
Días |
??????? |
Cerdos portadores |
| Sterpto coccus suis |
Día 0 |
(no) |
Lactancia a finalización
Gral: recien destetados |
Hs. |
Roedores moscas |
Contacto directo Durante
el nacimiento |
Modificado Amass, 1998.
Las pruebas serológicas y microbiológicas por lo tanto deben de poseer una buena
sensibilidad y especificidad, ya que en las granjas no se observa ningún problema
que pueda hacer pensar que la PCP o la neumonía enzootica, o la pasteurelosis
pulmonar o enfermedad de Glasser estan presentes. La serología por ejemplo debería
de utilizarse por lo tanto, entre otras, en las siguientes situaciones:
1. Confirmación de una infección crónica,
previa evaluación de las lesiones pulmonares típicas.
2. Estudio de la cinética de anticuerpos en una granja infectada, para establecer
programas de vacunación y/o medicación por vía oral (alimento/agua).
3. Identificación de maternidades infectadas en el caso de la compra de lechones
para sistemas de tipo todo dentro, todo afuera. Este punto es importante,
para la decisión de muestrear madres, se debe tener en cuenta que hay baja
prevalencia, con títulos de anticuerpos bajos y por lo tanto se dificulta
la interpretación (aquí la PCP deberá tratarse como una enfermedad de tipo
individual, y muestrear a todas las marranas). En el caso de los lechones
se deberan de muestrear antes y después del destete a partir de las 8 semanas
de edad (dependiendo del sistema de SEW o MEW o convencional).
4. Verificación de la respuesta de anticuerpos frente a una vacunación (se
debera de tomar en cuenta que tipo de inmunógeno se esta aplicando para interpretar
los resultados serológicos con los diversos antígenos).
5. Estudios serológicos tendientes a un programa de erradicación (Gottschalk,
1998)
XI.
SELECCIÓN DE LA MEJOR PRUEBA DIAGNOSTICA
Existen numerosos criterios que determinan cual es la mejor prueba de diagnóstico
para una situación dada e incluyen: COSTO, SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD, RAPIDEZ
y DISPONIBILIDAD. Todos esos criterios pueden ser correlacionados a la situación
específica. (Zeman, 1997).
Los laboratorios dedicados al servicio de la industria porcina, que cuentan
con una buena infraestructura diagnóstica, como son los laboratorios de diagnostico
de los Estados Unidos (Zeman, 1997) y probablemente algunos de Salud Animal
de México (Valdivia et al, 1997) están enfocados básicamente entre otros, a
estos objetivos:
a) A identificar la causa precisa del brote agudo de la enfermedad (desde el
diagnóstico de la enfermedad hasta la elaboración de seroperfiles), lo cual
permite precisar los métodos de control, para ser rápidamente implementados;
permite colectar datos de la enfermedad, para establecer las estrategias de
los cambios de manejo, que permitirán prevenir el mismo problema, en el siguiente
ciclo de producción
b) A Identificar y eliminar a los animales expuestos conocidos (aplicando la
serología ampliamente) para erradicar ciertas enfermedades reguladas por el
Gobierno Federal (como es el caso de la Brucelosis)
Las reglas de oro para el Dr. Zeman (1997) y que muchos patólogos y microbiólogos
compartimos para el diagnóstico de una enfermedad clínica es:
1º. Identificar las lesiones patológicas que expliquen la aparición de los signos
clínicos.
2º. Identificar los patógenos o factores (traumas, toxinas, medio ambiente entre
otros) que son conocidos y que están produciendo estas lesiones.
La identificación en ambos casos es crítica, ya que actúan en forma sinérgica
para producir un diagnóstico definitivo. La investigación de las enfermedades
infecciosas, con solo la observación de las lesiones sin el soporte microbiológico,
restringe considerablemente las posibilidades del diagnóstico, así un diagnóstico
definitivo por solo las lesiones no puede ser posible.
EJEMPLO: Meningitis purulenta en cerdos de 2 semanas de edad: Meningitis bacteriana.
Para el diagnóstico definitivo es necesario realizar cultivos para identificar
a: Streptococcus suis, Haemophilus parasuis, Escherichia coli y otros patógenos.
Si fuera al contrario, la identificación de estos agentes (aún aplicando las
técnicas de PCR) y que no correspondieran a las lesiones patológicas encontradas,
es solo la identificación de potenciales patógenos que son ubicuos en la piara
y en las instalaciones (Zeman, 1997).
Si la razón de la prueba de diagnóstico es algo (herramienta diagnóstica) para
el diagnóstico clínico, muchas veces es muy importante clarificar la meta precisa
de la prueba. Si se desea determinar el ambiente limpio de una enfermedad dada,
varios factores deben ser considerados en la prueba diagnóstica, como serían:
SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD, NIVEL DE PREVALENCIA ESPERADA y NIVEL DE CONFIANZA
SATISFACTORIA.
a) Sensibilidad: Es la habilidad de una prueba para detectar a TODOS los verdaderos
positivos.
b) Especificidad: Es la habilidad de una prueba para detectar SOLO a los verdaderos
positivos.
Si la prueba es 100% sensible no presentaría falsos negativos (no falla para
detectar a los verdaderos positivos); si la prueba es 100% específica no presentaría
falsos positivos (no falla para detectar a los verdaderos negativos). Sin embargo,
la sensibilidad y la especificidad van de la mano, es decir cuando se afecta
uno también el otro. El efecto esperado es cuando aumenta la sensibilidad, puede
disminuir la especificidad o bien cuando aumenta la especificidad, puede disminuir
la sensibilidad. Si fuera 100% sensible y 100% específica se estaría frente
a una prueba perfecta. Desafortunadamente existen pocas pruebas perfectas en
el mundo, y se tiene que determinar un cierto nivel de aceptabilidad, como ocurre
con el PCR.
El nivel de aceptabilidad esta relacionado a la pregunta especifica que se intenta
responder. Si la decisión a tomar es la erradicación de una enfermedad dada,
la Normas Oficiales indican que la prueba debe de tener una alta sensibilidad,
para identificar a los infectados en forma individual. La prueba mas sensible
sería preferida, si la especificidad estuviera insignificantemente comprometida,
ya que durante la erradicación un falso positivo raro (verdaderamente negativo)
sería mejor para el proceso del mismo, que un falso negativo raro (verdaderamente
positivo), ya que estos animales falsos negativos estarían diseminando la enfermedad
en la demás población, y afectaría seriamente el proceso de erradicación (Zeman,
1997).
En general, la SENSIBILIDAD de una prueba es de suma importancia, cuando los
animales probados y resultaron positivos fueron los que produjeron la enfermedad
en la piara sana y limpia, y fueron los que causaron el brote. Así. la ESPECIFICIDAD
se convierte de suma importancia, cuando hay interés que un falso positivo no
ponga fin a la utilidad de un animal valioso (Zeman, 1997).
El costo de las pruebas de laboratorio en medicina veterinaria (sobretodo en
la producción animal: cerdos) es siempre un problema, en algunas ocasiones el
costo de $10.00 dólares por prueba, puede ser útil, sin embargo, el costo de
$25.00 dólares por prueba, afectaría seriamente la economía de la producción
animal. En otras ocasiones el costo de $50.00 dólares por prueba, puede ser
de gran utilidad por la prevención de pérdidas económicas.
Ahí es donde se tiene que tener muy claro, que pregunta específica se quiere
contestar con la prueba a utilizar y que a la vez sea económica. La popularidad
de la prueba afecta también el precio, una demanda de la prueba hace que el
laboratorio, se equipe y adquiera los reactivos necesarios para llevarla a cabo
y la hace menos cara. De ahí, que los laboratorios estén considerando el costo
de las nuevas pruebas y las estén comparando con el costo de las viejas pruebas,
y a la vez estén analizando las ventajas y desventajas de las mismas (Valdivia
et al., 1997; Zeman, 1997).
XII. TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR APLICADAS
AL DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO DE LAS ENFERMEDADES RESPIRATORIAS
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica usada para amplificar
regiones específicas del ADN. Los principios de esta técnica fueron descritos
primeramente en 1971 pero no fue hasta los años 80s que la tecnica fue adaptada
y desarrollada completamente. En aquella época esta técnica constituyó una señal
muy importante de avance en la biología molecular ya que permitió la gran producción
de segmentos específicos del ADN. Esta técnica se basa en el hecho de que ciertas
secuencias de una región dada de la molécula del ADN son conocidas (Gingold,
1990).
Por lo tanto PCR se utiliza para amplificar la región entre dos secuencias conocidas.
El producto amplificado se puede detectar por diferentes métodos, variando en
sensibilidad, exactitud y viabilidad para el diagnostico de laboratorio, como
son: el corrimiento en gel de agarosa, Southern Blot, microtítulo en microplacas
y la detección directa de tiempo real de los productos en el tubo de PCR visualizado
por fluorescencia (Mathew, 1990. Higushi et al., 1993).
La técnica de PCR se puede utilizar para identificar microorganismos causantes
de enfermedad y de suma importancia en medicina en donde es necesario un diagnostico
rápido. Hoy en dia el PCR no se puede considerar como substituto de la bacteriología
clásica. PCR es de inferior sensibilidad a los métodos clásicos cuando las bacterias
tienen crecimiento rápido, no obstante tiene muchas ventajas al detectar microorganismos
de crecimiento lento o cuando la detección se lleva a cabo en muestras contaminadas.
Una de las ventajas más evidentes de la técnica de PCR es la rapidez de los
resultados y de que se pueden trabajar muchas muestras. Con la bacteriología
tradicional se necesita un mínimo de 2 días para alcanzar una diagnostico rápido.
Pero en el caso del PCR, solamente algunas horas son necesarias. Por lo tanto
las bacterias de lento crecimiento, o bacterias no cultivables, virus, así como
hongos, son los mejores candidatos para ser detectados por PCR (Calsamiglia.
1999; Calsamiglia et al., 1999).
Como ventajas del PCR es la variedad de aplicaciones, y tradicionalmente se
ha utilizado como una herramienta de díagnóstico para detectar ciertos microorganismos
especificos en muestras clínicas. El PCR también puede utilizarse para realizar
estudios epidemiológicos y llevar a cabo una vigilancia epidemiologica en las
granjas animales. Otra importante aportacion del PCR es que permite la deteccion
de los animales que son portadores de cierta enfermedad (Calsamiglia, 1999;
Mendoza et al., 1999) .
Como desventajas del PCR. La detección de falsos negativos: Si los iniciadores
no son específicos, si la concentración de los componentes no estan estandarizados
y las condiciones de la reacción no estan claras podrían obtenerse resultados
falsos negativos. Con respecto a los resultados falsos positivos: Si los iniciadores
son homólogos a las secuencias pero no al gen blanco o si los productos y soluciones
estan contaminadas con reacciones anteriores, entonces se podrian presentarse
falsos positivos (Calsamiglia, 1999). Por lo que el PCR detecta ADN pero no
la distingue entre los microorganismos vivos y muertos, ni tampoco detecta sensibilidad
a antibióticos.
Muchas técnicas basadas en PCR han sido descritas y se han aplicado en la medicina
veterinaría. El diagnostico rutinario para algunos laboratorios de enfocan a
los siguientes microorganismos. Pasteurella multocida se detecta toxina positiva
DNT (+); Mycoplasma hyopneumoniae (nested-PCR); Streptococcus suis y Haemophilus
parasuis (rep-PCR) y PRRSv (Taqman). Éstos son los agentes principalmente implicados
en el Complejo de la Enfermedad Respiratoria de los Porcinos (PRDC). Este síndrome
es cada vez mas importante la causa de una baja productividad de los cerdos,
caracterizado por un crecimiento lento, la baja eficacia alimenticia, anorexia,
tos y el disnea, donde están implicados los microorganismos antes de mencionados
(Calsamiglia, 1999; Calsamiglia et al., 1999; Dee, 1996; Lichtensteiger et al.,
1996).
Dentro de este complejo PRDC se encuentra mas frecuentemente diagnosticado al
Mycoplasma hyopneumoniae (Dee, 1996). El estudio de la neumonía causada por
Mycoplasma hyopneumoniae ha sido obstaculizada por métodos inadecuados de diagnóstico.
Muchas de las pruebas actualmente disponibles son relativamente insensibles
o no específicas, demasiado costosas o difícil para realizar un diagnóstico
rutinario. El nested-PCR ha permitido un diagnóstico rápido y actualmente en
la Universidad de Minnesota se lleva como diagnóstico de rutina. La extracción
del DNA se lleva a cabo de los hisopos nasales que llegan de la muestra de los
cerdos (Calsamiglia et al., 1999).
Por otro lado las cepas de Pasteurella multocida toxigénicas y no toxigenicas
no pueden ser detectadas por la morfología o por las reacciones bioquímicas
estándares. La viabilidad de usar PCR para la detección exacta y rápida de Pasteurella
multocida toxigénica de hisopos nasales fue investigada pero los resultados
no fueron concluyentes (Leinchtensteiger, et al., 1996). Sin embargo otro estudio
en la Universidad de Minnesota mostro que de cultivos purificados, se podian
detectar cepas de Pasteurella multocida DNT (+), esta técnica fue muy sensible
y puede ser comparada con ELISA y con el cultivo celular (Amigot, et.al., 1998).
La infección de los lechones con el virus del Sindrome Reproductivo y Respiratorio
Porcino (PRRSv) se asocia al aumento de las enfermedades respiratorias, con
tasa de crecimiento bajo, y elevada mortalidad. El PRRS esta siendo apararentemente
controlado con el uso de vacunas de vacunas vivas (MLV) o con manejo (Dee y
Philips, 1997). Es importante determinar cuando la infección ocurre en la vida
de los cerdos, por lo que que el PCR (Taqman) se ha utilizado como una prueba
de díagnóstico para detectar el ácido nucleico viral del PRRS. Esta técnica
se puede llevar a cabo en suero, semen, o tejido para detectar el RNA o la ADN
viral (Molitor, 1997). En este estudio los resultados de la prueba de PCR indicaron
que la serología no solamente puede ser adecuada para definir el status de PRRSv
en un hato . Este caso sugiere que las técnicas moleculares puedan ser útiles
conjuntamente con la serología. Observaciones de muestras clínicas, y el analisis
de los datos de la producción determinaron correctamente el status de PRRSv
en el hato y asi definir y establecer claramente el período en la vida del lechón
durante la cual son infectados. Una vez que se recoja y se evalúe esta información,
las estrategias óptimas de la intervención se pueden determinar para el hato
(Dee y Philips, 1997, Zimmerman, et.al., 1998).
En el caso de Streptococcus suis. y de Haemophilus parasuis la técnica de rep-PCR
ha mostrado resultados muy útiles para el estudio de la epidemiología en las
piaras. La técnica rep-PCR identifica cepas individuales, aún del mismo serotipo
(Torremorrell, 1999). Hemos demostrado que la mayoría de los brotes de la enfermedad
en granjas son debidos a una sola cepa. También esta técnica nos ha permitido
observar la transmisión de estas cepas entre granjas (Mendoza et al., 1999).
XIII. SISTEMA RÁPIDO PARA EL DIAGNOSTICO
SEROLOGICO DE App- Hps-Pm-Mh DENOMINADO NEUMOTESTMR . (Marca Registrada UNAM).
(Ciprián, et al. 1999)
1. METODOS DE DIAGNOSTICO DE LAS ENFERMEDADES RESPIRATORIAS BACTERIANAS EN MÉXICO.
El diagnóstico definitivo de las enfermedades respiratorias del cerdo, en las
que se incluyen; Pleuroneumonía Contagiosa Porcina, PCP; Neumonía Enzoótica,
NE; Pasteurelosis Pulmonar, PP y Enfermedad de Glasser, EG, deben ser oportunos
y rápidos y es esencial para identificar a Mycoplasma hyopneumoniae y a los
diferentes serotipos y tipos prevalentes de Actinobacillus pleuropneumoniae;
Pasteurella multocida y Haemophilus parasuis prevalentes en las zahúrdas y en
las granjas, así como en las diferentes zonas porcícolas del país, ya que permite
utilizar y/ó elaborar los biológicos/reactivos adecuados para el diagnóstico,
así como los biológicos para la inmunización de los animales susceptibles. En
México, así como en los países latinoamericanos, el diagnóstico de las enfermedades
respiratorias bacterinas lo llevan a cabo de la siguiente manera:
a) Observación de los signos clínicos en el cerdo y en los de la zahúrda, este
método no es confiable, ya que solo los signos clínicos que se presentan en
cursos agudos de las afecciones respiratorias, permiten identificar a la PCP,
quizás a la EG, mientras que en los casos crónicos de la misma PCP y EG, además
de la NE y PP pasan inadvertidos, y solo se reflejan en los parámetros de la
Ganancia Diaria de Peso (GDP) y Conversión Alimenticia (CA).
b) Observación de las lesiones a la necropsia de los animales muertos de los
casos agudos o durante la inspección de las canales, en los centros de abasto
de los casos crónicos. Para el estudio patológico se requiere de los servicios
de un Médico Veterinario especialista en Patología, y aunque algunas lesiones
son propias de la PCP se pueden confundir con EG, no así con NE y PP, sin embargo
no podemos identificar a los serotipos prevalentes en las zahúrdas de una misma
granja.
c) Aislamiento, identificación y tipificación de los microorganismos presentes
en los pulmones de los cerdos con problemas agudos o bien crónicos. Este proceso
tarda de 48 a 72 horas en el mejor de los casos, como seria con Actinobacillus
pleuropneumoniae y Pasteurella multocida; pero es lento en el caso de Haemophilus
parasuis, y mas lento para Mycoplasma hyopneumoniae. Para realizar estas técnicas
es necesario contar con un laboratorio bien establecido, en donde además de
contar con los reactivos, medios de cultivo y antisueros conocidos, se requiere
del personal calificado, y en México existen pocos laboratorios que brindan
este servicio.
d) El diagnóstico serológico se lleva a cabo en los cerdos vivos de las granjas
o en los cerdos en los centros de abasto. El método serológico es uno de los
mas adecuados, ya que se puede realizar en los animales vivos con y sin signos
clínicos, no requiere del sacrificio de los cerdos, es mas rápido y nos permite
hacer perfiles de la enfermedad, identificando el punto de infección en la granja,
además permite identificar los serotipos prevalentes. Para el diagnóstico serológico
de la PCP, NE, se encuentran algunas pruebas tales como; aglutinación, aglutinación
con partículas de latex, aglutinación lenta en tubo; aglutinación lenta en tubo
con 2-mercaptoetanol, hemoaglutinación indirecta, fijación de complemento y
ELISA entre otras. Pocas de estas pruebas se realizan en México, y las que se
utilizan son mas para estudios de investigación que para diagnóstico, debido
principalmente a la falta de infraestructura, equipo, y personal capacitado,
que solo los laboratorios de las Universidades e Institutos cuentan (Ciprián
et al., 1990).
La problemática acerca de la PCP, PP, NE y EG expuesta anteriormente motivo
a los autores (Ciprián et al., 1988; Colmenares et al., 1992; Mendoza et al.,
1992 y Torres et al., 1992) de este trabajo al desarrollo de un paquete tecnológico
diseñado para elaborar a nivel industrial KITS de diagnóstico serológico de
la PCP, PP, NE y EG; empleando tecnología sencilla y de bajo costo; paquete
tecnológico denominado NEUMOTESTmr App; -Pm; -Mh; -Hps (mr: marca registrada
por la UNAM), que permitirá conocer la situación de la granja con respecto a
la enfermedad, permitirá conocer mediante los perfiles serológicos los puntos
de infección o las ventanas inmunológicas y así poder establecer las medidas
de control necesarias.
2. RESUMEN DE LA INVENCION.
El paquete tecnológico NEUMOTESTmr App; -Pm; -Mh; -Hps (mr: marca registrada
por la UNAM), consiste en un método rápido que no requiere equipo de laboratorio,
se realiza en unos minutos y solo requiere de pocos mililitros de suero del
animal a estudiar, por lo que no se necesita de personal calificado. El método
rápido es un ensayo de diagnóstico serológico por medio de una prueba de aglutinación
directa en placa, que ofrece la única oportunidad de distinguir directamente
en la propia granja, si un cerdo ha sido infectado o si el cerdo está sano.
NEUMOTESTmr App; -Pm; -Mh; -Hps (mr: marca registrada por la UNAM), es una prueba
de aglutinación en placa destinada a identificar directamente anticuerpos (de
la clase IgG de alta afinidad) capsulares de Actinobacillus pleuropneumoniae
(serotipos 1 al 12); anticuerpos (clase IgG) LPS de Pasteurella multocida y
anticuerpos (clase IgG) capsulares de Haemophilus parasuis y anticuerpos IgG
contra Mycoplasma hyopneumoniae presentes en el suero de cerdos de cualquier
edad.
El paquete tecnológico consiste en un estuche portatil diseñado para diagnosticar
cerdos infectados con Pasteurella multocida (Pasteurelosis Pulmonar, PP); Mycoplasma
hyopneumoniae (Neumonía Enzoótica, NE); Actinobacillus pleuropneumoniae (Pleuroneumonía
Contagiosa Porcina, PCP) y Haemophilus parasuis (Enfermedad de Glasser, EG).
El sistema rápido de diagnóstico serológico se realiza mediante las pruebas
de aglutinación o de aglutinación en latex que permite hacerlo en la misma explotación
porcina y además de que distingue en los casos de Pasteurella multocida (Pasteurelosis
Pulmonar, PP); Actinobacillus pleuropneumoniae (Pleuroneumonía Contagiosa Porcina,
PCP) y Haemophilus parasuis (Enfermedad de Glasser, EG), si los cerdos están
infectados y en el caso de Mycoplasma hyopneumoniae (Neumonía Enzoótica, NE)
determinar los puntos de infección mediante el uso de perfiles serológicos.
El sistema de diagnótico serológico es un estuche que contiene los antígenos,
para realización de las pruebas serológicas; estos antígenos varían desde de
Pasteurella multocida (tipos capsulares A y D comunes); Actinobacillus pleuropneumoniae
(serotipos capsulares: 1, 2, 3, 4,5a, 5b, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12); Haemophilus
parasuis (serotipos capsulares: de alta virulencia ++: 1, 5, 10, 12, 13 y 14;
o bien serotipos de relativa virulencia +: 2, 4 y 15); hasta el de Mycoplasma
hyopneumoniae.
El método para diagnosticar la pasteurelosis pulmonar, la pleuroneumonia, la
enfermedad de Glasser o la neumonía enzoótica comprende los pasos de preparar
un reactivo de aglutinación o de aglutinación en latex; de estabilizar el reactivo
utilizado, a temperatura ambiente en un tiempo corto; de depositar enseguida
el suero de muestra en una de las celdas de la placa de prueba; incorporar el
reactivo de aglutinación o de aglutinación en latex a la muestra y mezclar enseguida,
enseguida se someten los resultados a un método comparativo de interpretación
cualitativa, en donde la muestra celda de cerdos infectados presenta un aspecto
grumoso, en tanto que la celda de cerdos sanos ó vacunados (siempre y cuando
no sean recién vacunados, es decir después de 15 días posvacunación), aparecerán
sin grumos.
Otro de los objetivos de la invención es proporcionar un equipo y método en
donde los reactivos utilizados permiten que el diagnóstico de las enfermedades
respiratorias bacterianas sea de fácil operación y eficiente por no presentar
falsos negativos, permitiendo el manejo de los animales sanos de la granja cuando
se utiliza como prueba tamiz de monitoreo. Otro mas de los objetivos de la invención
es que solo se requiere de una mínima parte del suero para efectuar el diagnóstico
y por lo mismo se pueda aplicar a una granja completa, lo que permite evaluar
el status inmune de la granja valorando e interpretando los seroperfiles.
XIV. AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al MVZ David Trujillo por la asesoría técnica en informática.
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Autor: Dr. Abel Ciprian Carrasco - Dra. Susana Mendoza Elvira
Fecha de Publicación:
(3 enviados)
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 DISCUSIONES SOBRE ESTE TEMA.
 
| 08/11/2004 |
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VICTOR CALDERON JIMENEZ
México |
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MUY BUEN ARTICULO, EN MI CASO QUE PRESENTO EN 2 DIAS MI EXAMEN PROFESIONAL SOBRE NEUMONIA ENZOOTICA, ES MUY IMPORTANTE ENCONTRAR ESTE TIPO DE INFORMACION COM APOYO PARA LA DEFENSA EN EL EXAMEN, FELICITACIONES. | Respuesta Chequeada por Engormix.com  |
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| 13/09/2005 |
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Sería importante tener acceso al kit para aplicarlo en zonas donde no se tiene más que las pruebas de USA, y poder realizar una verificación de la efectividad con animales de diverso origen. | | Respuesta Chequeada por Engormix.com |
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| 21/12/2006 |
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Hola Dr. Ciprian.
Estoy interesado en el kit diagnóstico vivo en Ecuador, y quisiera saber los contactos comerciales o la forma de adquirirlo. | | Respuesta Chequeada por Engormix.com |
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