Evaluación de la eficacia de un aporte de Nucleótidos Específicos de cerdo en alimento balanceado de cerdas reproductoras desde el día 7 antes del parto y hasta el destete de los lechones

El uso de nucleótidos, como aporte nutricional en dietas de cerdas y lechones se justifica en el hecho de que un aporte extra de estos compuestos acelera la división celular de los tejidos, sobre todo en las edades tempranas, tanto en el claustro materno como en la fase postparto y hasta el destete. El desarrollo de los principales tejidos del individuo se promueve hasta alcanzar el máximo desarrollo posible. Así, un mayor desarrollo de tejidos como el Digestivo, Nervioso, Inmuno Retículo Endotelial, Hormonal, etc.… sabemos que afecta positivamente a la salud del lechón y por lo tanto a sus parámetros zootécnicos y estado sanitario. En el caso de las cerdas, el desarrollo mamario y la excreción de Inmunoglobulinas esta descrito como uno de los efectos más importantes a tener en cuenta. El desarrollo tisular fetal, también se ve afectado positivamente, en menos resorciones fetales, menos abortos espontáneos, mayor número de fetos viables y posiblemente más peso de los fetos al nacimiento.

Nucleoforce es un extracto de Levadura con nucleótidos, obtenido a partir de células muertas de Saccharomyces Cerevisiae. Son nutrientes esenciales, que se caracterizan por ser la unidad estructural de los ácidos nucleícos de las células. Así pues son especialmente necesarios para el desarrollo de tejidos con una alta tasa de replicación celular, como son el sistema reproductivo, inmunitario y digestivo, y que no llegan a cubrir sus necesidades únicamente con la síntesis endógena. Su composición molecular se basa en un azúcar, una base y de uno a tres grupos fosfato. El huevo y leche son sustancias ricas en nucleótidos suministrando a los animales jóvenes una fuente de nucleótidos disponibles para los tejidos con escasa capacidad de síntesis de novo.

En el ganado porcino el destete ha demostrado ser un período estresante, con posibles efectos sobre el desarrollo del sistema inmune (Johnson et al., 2006), el intestino, y la microbiota intestinal (Pluske et al., 1997). Muchos estudios confirman que la composición de la dieta es un factor que puede cambiar la morfología intestinal y, por lo tanto, puede afectar a la salud gastrointestinal de los lechones (Boudry et al., 2004). Ingredientes de piensos alternativos (por ejemplo, probióticos o prebióticos) se han sugerido para apoyar la salud intestinal (Lallès et al., 2007).

Nucleótidos de la dieta representan un grupo de agentes bioactivos, que contribuyen a la palatabilidad de los alimentos (Cairoli et al., 2008) y ejercen una acción beneficiosa sobre la morfología gastrointestinal y sus funciones, el sistema inmunológico, y la microbiota intestinal de las especies monogástricos (Sauer et al., 2011). Bajo ciertas condiciones (de crecimiento rápido, consumo de alimento limitado, estrés o los desafíos inmunológicos), cuando el suministro exógeno no es suficiente, los nucleótidos pueden convertirse en nutrientes esenciales (Cosgrove, 1998). Hay varios informes en los que el uso de nucleótidos en las dietas de cerdos, suministrados ya sea como levadura viva o extracto de levadura, se ha descrito; Sin embargo, los resultados sobre la respuesta de los cerdos son equívocos. Los productos de cultivo de levadura contienen cantidades variables de nucleótidos además de las células viables y componentes de la pared celular; Por lo tanto, es difícil atribuir los efectos biológicos observados eclusivamente a los nucleótidos específicos presentes en estos productos (Sauer et al., 2011).

En lechones, no se han realizado estudios para evaluar los efectos biológicos y los beneficios para la salud de las cantidades de alimento conocida de nucleótidos puros (Sauer et al., 2011). Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de una mezcla de nucleótidos libres complementado con lechones post-destete de d 20 a 39 o 40 en el crecimiento, el estado inmunológico, morfología del intestino delgado, y el número de bacterias en el bolo alimenticio del yeyuno y el ciego y en las heces.

 

Evaluar el efecto de una suplementación con NUCLEOFORCE PIGLETS® en cerdas desde el día 7 antes del parto hasta el día del destete de los lechones.

Evaluar el efecto de una suplementación con NUCLEOFORCE PIGLETS® en las cerdas a través de los resultados zootécnicos e índices de salud de los lechones producidos por esas cerdas, antes del destete y hasta el final de la transición a cebo.

 

Diseño experimental

Se realizaron 3 tratamientos en madres, en base a la suplementación de dos dosis de NUCLEOFORCE PIGLETS® diferentes en el pienso que se usa en la jaula de partos (7 días antes del parto y hasta el destete), y un grupo control sin NUCLEOFORCE PIGLETS®.

Nº de Lotes y número de animales experimentales (72 cerdas):

• Lote T1: Lote estándar de la granja. Madres sin suplementar con NUCLEOFORCE®.
• Lote T2: las madres se suplementarán con NUCLEOFORCE®, a razón de 250 g/t en el pienso de Lactación (7 días antes del parto hasta el destete).
• Lote T3: ídem lote 2.

En este lote se aplicará NUCLEOFORCE® a la dosis de 500 g/t

Análisis y medidas

Para todos los tratamientos analizamos y están disponibles:

- Alimento balanceado:

Análisis del nivel de Nucleótidos en pienso de Lactación.
- En madres:

Parámetros reproductivos: intervalo destete-celo, intervalo destete-cubrición fértil, porcentaje de fertilidad, porcentaje de repeticiones, número de nacidos totales vivos y muertos, porcentaje de mortalidad en lactación y número de destetados. Peso de los lechones al nacimiento y al destete, de los que se deducirá ganancia Media Diaria, Consumo Medio Diario e Índice de Conversión, basado estos dos últimos en la producción láctea de cada cerda y en la ingesta de pienso de Pre iniciación si lo hubiere.

Parámetros productivos: peso de las madres a la entrada/salida del ciclo, Ganancia Media Diaria, Consumo Medio Diario e Índice de Conversión.

La Producción Láctea de las madres, se medirá mediante la Ecuación planteada por NRC a tal efecto (Peso vivo al destete).
- En lechones (en la Fase de Transición):

Parámetros productivos: peso al destete, GMD, CMD e IC.
Parámetros sanitarios: % de diarreas y % de bajas.
Niveles de IgG, cortisol, proliferación linfocitos en plasma (día 21 y 52). Dos lechones por corral día 21, y día 52.
Todos los datos fueron tratados estadísticamente mediante el programa SAS.
 

Partimos de pesos medios al nacimiento muy similares (1.430+- 19 gramos) siendo de 1,448 – 1,432 y 1,411 Kg/Lechón en grupos T1, T2-250 y T3-500 respectivamente.

El peso al destete de los tres grupos también es muy parecido (5.983+-129 gramos) siendo de 5,988 – 5,852 y 6,110 Kg/Lechón en grupos T1, T2-250 y T3-500 respectivamente. Destacar una ganancia diaria mayor de 10 gramos en los lechones del T3 Nucleoforce 500 ppm.

El peso a los 61 días de vida de los tres grupos ya es claramente diferente. El lote control pesa 21,083 Kg/lechón, el lote prueba T2-250 20,473 Kilos y el lote prueba T3-500 22,932 Kg. Los lechones del tercer lote crecen 50 gramos más al día, y alcanzan un peso de un 9,6 % superior a la media de los dos primeros grupos.

Aún más interesante de destacar que esa mejora de peso del lote prueba T3-500 se debe también, y sobre todo a una desviación de los pesos sobre la media hacia la derecha de la curva de Gauss, teniendo un menor porcentaje de lechones de bajo peso al final.

Al final del ensayo el porcentaje de lechones con menos de 18 kilos (20 % inferior a la media del peso de todos los lechones) ha sido del 26, 23 y 13 % en los lotes T1, T2-250 y T3-500. En el lote T3-500 prácticamente la mitad que en los dos anteriores.

Al final de la prueba el porcentaje de lechones con elevado peso (> 24 kilos = + 20 % sobre el peso medio de todos los lechones) ha sido del 12, 19 y 29 % en los lotes T1, T2-250 y T3-500. En el lote T3-500 prácticamente el doble que en los dos anteriores, destacando también de forma significativa el lote T2-250 frente al control.

En síntesis, en los lechones prueba frente al control, tenemos menos lechones colas (50% en T3-500 ppm) y más lechones de elevado peso (50 % T2-250 ppm y 140 % T3-500 ppm), teniendo así la curva de Gauss desviada hacia la derecha en los lechones de cerdas que han sido alimentadas en lactación con nucleótidos.

Grafica 1 – RANGOS PESOS SALIDA (Kilos) POR GRUPO (%)

 

Después del sacrificio humanitario de los de los lechones, se practicó la necropsia completa y ordenada de los animales. Se realizó una incisión en la línea media para abrir las cavidades abdominal y torácica. El examen macroscópico no reveló alteraciones significativas en los órganos internos estudiados.

Después de 72 horas a temperatura ambiente, tomamos muestras de 5 cm de longitud del intestino delgado desde tres lugares diferentes: a los 10 cm desde el estómago (duodeno - 1), en el medio del intestino delgado (yeyuno - 2), y a los 10 cm de la válvula ileocecal (íleon – 3). De 5 a 8 secciones transversales de cada localización fueron obtenidas y depositadas en casetes de plástico para su posterior inclusión en incluidas en parafina sintética (Casa Álvarez Histo-comp, ref. CA-09-5658), con un punto de fusión de 56ºC, utilizándose un procesador automático de tejidos Leica© ASP 300, con un programa de cambios automáticos de alcoholes de creciente graduación e histo-clear. Los bloques fueron realizados en una unidad formadora de bloques, consola Leica© EG1140H y placa de frío Leica© EG1130. En todos los casos se orientaron las biopsias para facilitar su estudio.

En el caso de la cuantificación del número de células caliciformes, se realizará mediante el contaje en 6 campos de 40x, el número de células positivas con la técnica de PAS. De esta forma cuantificaremos para cada preparación (correspondiente a un animal) 66231 μ2.

También se realizó un estudio inmunohistoquímico para detectar la proteína nuclear Ki67 (PA0230 MMI - Novocastra – Leica) en las muestras de este trabajo. Fracción de crecimiento mediante el empleo de la técnica inmunohistoquímica de Estreptoavidina biotina con el empleo del anticuerpo primario de Ki 67 (proteína no histona que marca todas las fases del ciclo celular salvo la de reposo "Go" – Figura 2) – Su detección tiene más interés que el índice mitótico, ya que este último solo valora las células en división. El estudio inmunohistoquímico se llevó a cabo en cortes del yeyuno fijadas en formol e incluidas en parafina sintética, montados en portaobjetos ionizados con el fin de potenciar la adherencia de las muestras.

 

Existen marcadas diferencias estadísticamente significativas principalmente entre los grupos 1 vs 3 y 2 vs 3 en cuanto a la longitud de las criptas, número de vellosidades e índice de Ki 67. Los grupos 1 y 2 se comportan de una forma semejante como si fueran un mismo grupo. No hay diferencias estadísticamente significativas ni con la longitud de las vellosidades ni con el número de células caliciformes.

Los lechones de cerdas alimentadas con 500 ppm de nucleótidos frente a los otros dos tienen mayor longitud de criptas, mayor número de vellosidades e índice de proliferación celular.

 

Tomamos las muestras de calostro dentro de las primeras 8 horas posteriores al parto y de leche de 20 reproductoras de diferentes partos que no habían tomado nucleótidos en el pienso y 20 reproductoras de diferentes partos que habían tomado en el pienso 500 ppm de nucleótidos a las tres semanas de lactación, haciendo un pool de 4 madres hasta tener al final 5 muestras a analizar por tratamiento.

El consumo de pienso de lactación por cerda, fue el mismo en los dos tratamientos, con las mismas curvas de alimentación y tomando como base la razón de 2 Kg por cerda/día + 0,5 Kg por lechón definiéndolo en función del tamaño de la camada. Con esto controlamos el efecto directo del consumo de alimento de la madre sobre la producción láctea y sobre el peso del lechón al destete.

Cada muestra representaba un pool de entre 3-5 glándulas mamarias distintas (al menos una torácica y una abdominal).

Las muestras se refrigeraron rápidamente y posteriormente se congelaron para enviarlas todas juntas al laboratorio hasta su análisis de nucleótidos. El análisis de nucleótidos se realizó mediante cromatografía.

 

Gráfica 2: concentración de nucleótidos en calostro por número de parto

Gráfica 3: concentración de nucleótidos en leche por número de parto

Tanto en calostro como en leche hay más concentración de nucleótidos cuando la cerda ha sido suplementada durante la última semana de gestación y durante la lactación.

Existe una trasferencia de nucleótidos a través del calostro y -leche.

La leche de la cerda es la única fuente de nucleótidos para lechones. La cantidad de nutrientes, como los nucleótidos, que son transferidos durante la lactancia son críticos a fin de proteger a los lechones neonatos tanto de futuros trastornos intestinales como a nivel inmunológico.