Principales puntos críticos en un centro de inseminación
Publicado: 20 de octubre de 2006
Por: Rafael Arlegui González, Magapor, S.L. / Departamento Técnico
Todos estos puntos podemos resumirlos en tres pilares fundamentales:
● Calidad del agua de laboratorio.
● Temperatura de trabajo y conservación de las dosis seminales.
● Bioseguridad, higiene y desinfección.
Agua de Laboratorio
La calidad del agua de laboratorio empleada constituye el primer punto a valorar.
Hemos de tener en cuenta que no cualquier tipo de agua es válido para permitir la supervivencia de las células espermáticas; pues estas necesitan unas condiciones específicas para su conservación óptima como son, por ejemplo, un pH entre 6.8 y 7.6, una osmolalidad de entre 280 y 330 miliosmoles/kg (aunque son capaces de resistir rangos mayores en el caso de la osmolalidad). Es por ello que se utiliza agua de laboratorio a la que se añade diluyente, para proporcionar a los espermatozoides el medio más adecuado a sus requerimientos fisiológicos; tanto fisico-químicos como nutricionales.
Nos encontramos de esta manera con que hay varios tipos de agua en función de su grado de destilación y pureza, todos susceptibles de ser utilizados en inseminación; a saber: TIPO I, TIPO II, y TIPO III.
De ellas el agua “ultrapura” es la TIPO I, pero apenas se emplea por ser de muy elevado coste su producción. Por eso las más utilizadas son las TIPO II y TIPO III.
Existen diversos sistemas de depuración de agua como la ósmosis inversa, destilación, desionización, etc. Según empleemos unos u otros, o combinaciones de ellos, obtendremos los distintos tipos de agua de laboratorio de mayor o menor pureza.
De todas formas, se emplee el tipo que se emplee, el agua de laboratorio debería cumplir unos mínimos recomendados en cuanto a sus propiedades y contenidos:
- Conductividad < 10 microsiemens/cm
- pH entre 5 y 8
- Dureza cálcica < 3 mg CaCo3 /l
- Presencia de bacterias < 50 ufc/ml
Un error bastante común a la hora de comprobar el grado de desionización de un agua de laboratorio es fijarse tan sólo en el pH. Esto, si bien es un método rápido y cómodo, no es fiable; pues a pesar de que es cierto que cuanto más pura sea un agua más se acercará su pH a la neutralidad (pH 7) hay que contar con que el agua capta CO2 del ambiente, lo que hace que su pH varíe mientras que se mantiene inmutable su carga iónica. Por ello hemos de medir la conductividad del agua para averiguar realmente su grado de desionización. Esto es, cuanto menor sea el valor obtenido para este parámetro menor será la capacidad del agua para conducir la electricidad, y por consiguiente menor la cantidad de iones en disolución; puesto que el agua pura no conduce la electricidad. Para hacernos una idea podemos comentar que la conductividad de un agua mineral común se encontraría en torno a los 300 µsiemens/cm.
Otro valor importante a considerar es el de la dureza cálcica, pues la presencia de Ca en el medio induce reacciones de capacitación en los espermatozoides; con lo que se acorta considerablemente el tiempo de vida útil de las dosis seminales, ya que los espermatozoides mueren poco tiempo después de capacitados.
Respecto a la carga bacteriana, obviamente esta ha de ser la menor posible para evitar posteriores problemas de contaminación en las dosis seminales.
En cuanto al origen del agua del laboratorio tenemos dos posibilidades, emplear agua destilada comercial envasada o producir nuestra propia agua de laboratorio.
En caso de optar por comprar el agua lo recomendable, ya que su calidad viene garantizada por el fabricante, sería adquirirla en envases pequeños, de no más de 5 litros, pues además de facilitar su manejo, esto nos asegura que se gasta cuanto antes evitando su contaminación una vez abierto el envase.
Si, por el contrario, decidimos producir nuestra propia agua a partir de agua corriente hemos de asegurarnos la máxima calidad posible del agua de partida (difícilmente conseguiremos agua de laboratorio de calidad si partimos de aguas fecales o excesivamente duras, por ejemplo). Lo ideal es utilizar agua potable de red tratada con cloro, lo que nos asegura una baja carga microbiana, a la que aplicaremos un adecuado proceso de purificación que elimine dicho cloro, pues es tóxico para el semen, y la mayor cantidad posible del resto de solutos. Fundamental en este punto es el mantenimiento en adecuadas condiciones de los equipos de ósmosis inversa, filtros, resinas, depósitos y cualesquiera elementos que intervengan en su producción para asegurar una óptima calidad del agua obtenida.
Es recomendable para verificar dicha calidad del agua resultante el realizar análisis periódicos de esta, tanto fisico-químicos como microbiológicos.
Temperatura
En el apartado concerniente a la temperatura hemos de señalar que hay dos momentos claramente diferenciados a los que corresponden respectivamente otros dos rangos de temperatura también distintos:
1- Recogida/procesado y envasado → 35-37ºC.
2- Conservación de las dosis seminales → 15-17ºC.
1- Todo el material que entre en contacto con el semen debe estar atemperado previamente a 35-37ºC para evitar problemas de aglutinación y disminución de la calidad seminal, por ejemplo durante la recogida, o errores de apreciación como pueden ser bajas motilidades aparentes por estar los portaobjetos demasiado fríos o calientes a la hora de la valoración, etc. Para ello es importante que todos los aparatos y sistemas se hallen en correcto estado de funcionamiento y calibración.
2- Por encima de 21ºC pueden producirse alteraciones de la membrana citoplasmática de los espermatozoides.
Por debajo de 14ºC aumenta mucho el riesgo de shock por frío de las células espermáticas. Hay que señalar que los espermatozoides porcinos son particularmente sensibles al frío en comparación con los de otras especies animales debido a la especial composición de su membrana en lo que a la proporción de fosfolípidos, ácidos grasos saturados e insaturados, y colesterol se refiere. Esta es una de las razones que explican la dificultad que se encuentra a la hora de llevar a cabo la criopreservación de espermatozoides de cerdo y las menores fertilidad y prolificidad obtenidas al inseminar con semen descongelado respecto al semen refrigerado.
Es así mismo muy importante verificar que la temperatura permanece constante durante la conservación, pues tan perjudiciales son las altas o bajas temperaturas como las fluctuaciones bruscas de esta para los espermatozoides. Los cambios operados en la fluidez de la membrana de forma reiterada dan como consecuencia un “desgaste” de la misma con la consiguiente disminución del periodo de vida útil de las dosis seminales. Para monitorizar dicha temperatura tenemos a nuestra disposición un amplio abanico de posibilidades como son la utilización de termómetros de máximas y mínimas; o, si se quiere mayor precisión, se pueden emplear elementos electrónicos de medición y registro (“datalogger”) o incluso el uso de cámaras de conservación con alarma incorporada que avisan cuando la temperatura interior supera determinado rango prefijado, bien sea por exceso o por defecto.
El elaborar y mantener las dosis seminales con la menor carga bacteriana posible es otro de los aspectos fundamentales para producir y distribuir un semen de calidad.
Lo primero es proteger nuestro centro de inseminación de la entrada de potenciales patógenos; para lo cual hemos de observar una serie de medidas de bioseguridad. De todas formas, y dado que el objetivo de este artículo se centra en el trabajo dentro del propio centro, no profundizaremos demasiado en este campo, limitándonos a citar las normas básicas de bioseguridad que deberían seguirse en cualquier centro de inseminación para evitar la entrada de agentes infecciosos que pudieran tanto afectar a la salud de los verracos como ser transmitidos vía semen:
● Centro alejado de otras explotaciones u otros posibles focos de contagio
(carreteras, mataderos, etc).
● Vallado de todo el perímetro (impedir el acceso de personas o animales salvajes
y/o domésticos).
● Vados y arcos de desinfección.
● Restricción y registro de visitas.
● Cuarentena obligatoria y alejada del centro para todos los nuevos animales.
Pero centrándonos en el propio centro de inseminación y la actividad diaria que en el se desarrolla podemos determinar que los principales puntos de riesgo que pueden actuar como focos de origen de contaminación bacteriana son:
■ Fecal.
■ Pelo, piel, prepucio del verraco.
■ Humanos, portadores de determinada flora cutánea.
■ Agua de boca; esta ha de estar tratada con cloro.
■ Agua destilada.
■ Vegetales (cama y/o comida).
■ Aire, sistemas de ventilación.
■ Patologías del verraco; orquitis, cistitis, uretritis, etc.
■ Materiales y maquinaria del laboratorio.
Así pues, una vez conocidos los posibles focos de contaminación, vamos a pasar a enumerar una serie de estrategias las cuales, incidiendo sobre dichos puntos, nos pueden ayudar a eliminar o reducir al máximo la presencia de bacterias en las dosis seminales:
● Utilizar material desechable.
● Cortar el pelo del prepucio frecuentemente.
● Emplear la técnica del doble guante para llevar a cabo la extracción.
● Vaciar el divertículo prepucial antes de la extracción y limpiar la zona alrededor.
● NO RECOGER la fracción pre-espermática pues contiene gran cantidad de bacterias procedentes del tracto uretral.
● Durante la extracción mantener el pene del verraco horizontal y paralelo al suelo para evitar que por el escurran impurezas al vaso de recogida.
● Realizar la extracción de machos problemáticos al final para evitar contaminaciones cruzadas.
● Limpiar la sala de recogida tras cada jornada y la cuadra del verraco al menos una vez a la semana utilizando un producto desinfectante.
● Lavar el material reutilizable del laboratorio con un detergente neutro que no deje residuos, después aclararlo con agua destilada, y en caso de que el material lo permita, esterilizarlo por calor en la estufa (120ºC durante 2h. por ejemplo).
● Lavar el laboratorio diariamente (suelo y superficies) con detergentes que no dejen residuos.
● Hacer circular cada día solución jabonosa por los circuitos y gomas de máquinas y bombas peristálticas, aclarar con agua destilada y volver a hacer circular alcohol de 70º, aclarando con agua destilada antes de su nuevo uso.
Técnica del doble guante, con el de fuera se realiza la limpieza y con el de dentro la extracción; es importante mantener el pene del verraco paralelo al suelo.
Son fundamentales la limpieza del laboratorio y las máquinas como las líneas de envasado.
Especial relevancia, hasta el punto de convertirse en un punto rítico en si mismas, tienen las gomas y conductos de las máquinas como las líneas de envasado, bombas peristálticas en general y cualquier circuito por el que pase el semen o el diluyente. Esto obedece a que su luz interior constituye un lugar ideal para que las bacterias se acantonen, ya que se dan las condiciones idóneas de humedad y temperatura si estos sistemas no son correctamente desinfectados.
Se hace por tanto necesario resaltar la importancia que reviste la concienzuda limpieza y desinfección diaria de todo el material que entra en contacto con el semen y el diluyente, pues estos, dada su composición rica en nutrientes, se ofrecen como medios de cultivo idóneos para el desarrollo de microorganismos a pesar de la inclusión de antibióticos; a los cuales, por otra parte, cada vez es mayor el número de bacterias que presentan resistencias. No en vano, algunas de estas especies bacterianas aisladas e identificadas en cultivos de dosis seminales (es el caso por ejemplo de Serratia marcescens) son las mismas responsables de no pocos procesos nosocomiales en las unidades de cuidados intensivos de los hospitales; haciendo harto complicada la tarea de los médicos a la hora de hacerles frente dada su enorme capacidad para desarrollar resistencias, incluso a antibióticos de la más reciente aparición.
Conviene reseñar, por otra parte, que la inclusión de combinaciones antibióticas en la formulación de los diluyentes tiene como objetivo el inhibir la proliferación bacteriana para conservar el mayor tiempo posible la vida útil de las dosis seminales; no el eliminar su presencia de las mismas. Cuanto más potente y de mayor espectro sea esta combinación antibiótica, mejor desarrollará su función, pero ante la presencia de presiones de infección altas o aparición de cepas resistentes no queda más alternativa que potenciar las medidas de higiene y desinfección.
Gran presencia de bacilos en una dosis seminal Contaminación por cocos 
Espermatozoide muerto con bacterias adheridas a su cabeza.
Bibliografía
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-Directiva 90/429/CEE del consejo, de 26 de junio de 1990, por la que se fijan las normas de policía sanitaria aplicables a los intercambios intracomunitarios y a las importaciones de esperma de animales de la especie porcina.
-G. Almond, P. Poolperm. Semen contamination and choosing antibiotics. Prooceedings of the North Carolina Healthy Hogs Seminar.
-Hume E BH, Willcox M, Aparición de Serratia marcescens como un patógeno de superficie ocular. Archivos Sociedad Española de Oftalmología, oct. 2004, vol.79, no.10, p.475-481. ISSN 0365-6691.
-Famiglietti A., Quinteros M., Vázquez M. et al. Consenso sobre las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en Enterobacteriaceae. Revista Argentina de Microbiología, ene/mar 2005, vol.37, no.1,p.57-66. ISSN 0325-7541.
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Inti Veterinaris
29 de marzo de 2008
Sobre la primera pregunta te comento que es mejor que todo el material utilizado sea desechable. No tengo experiencia en esterilización bajo estos sistemas que tu comentas.
Sobre la segunda, recolectar la fase post espermática puede ser un punto critico dependiendo el sistema de dilución y el procesado de la dosis. Si únicamente se realiza dilución e inseminación con semen fresco o conservación de 3 a 7 dias no tiene porque ser un problema, pero si se desea hacer congelación Si por la presencia de material contaminante y espermatozoides viejos que hay en las fases pre y post espermática que pueden alterar la integridad del producto como tal.
Sobre la tercera, acostumbro a hacer lavados exclusivamente con suero fisiológico o agua limpia no porque puedan afectar el eyaculado ,porque los diluyentes conservadores ya tienen antibióticos y no afectan a los espermatozoides, es simplemente porque a lo largo de mi experiencia he podido comprobar que a este nivel poco es lo que funcionan. Mas bien son un gasto innecesario de dinero.
espero que mis comentarios te ayuden.
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Universidad Nacional de La Plata - UNLP
16 de marzo de 2008
Antes que todo quería felicitarlos por el artículo y los aportes que han realizado todos ustedes.
Con respecto al artículo quisiera agregar que un factor importante en lo que respecta a la colecta de semen y los puntos críticos es: no olvidar que tanto el Agua como el Latex son espermicidas entonces tomar cuidado al momento de realizar la estracción, en la técnica refieirendome a que no tome contacto la porción rica del eyaculado con el Latex de ciertos guantes comerciales y en los lavados prepusiales los cuales deberían distar cierto tiempo y no ser realizados junto con la extracción.
Espero poder sumar al foro.
Un saludo cordial
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30 de octubre de 2006
Al colega Jaime Fernando:
La contaminación bacteriana del semen puede evitarse con medidas asepticas, por ejemplo el recorte del pelo cerca de la zona prepucial y los lavados del mismo de manera rutinaria con soluciones de NaCO2 o furacin.
por otra parte debes comprobar que tus diluyentes comerciales adquiridos lleven adicionado algun antibiotico de amplio espectro para disminuir los errores de contaminación que se nos lleguen a pasar si este no es el caso puedes adicionar tu diluyente con diversos antibioticos por ejemplo: gentamicina (100mg/lt, o bien lincomicina/espectinomicina(330/600mg/lt),o bien tilosina (600mg/lt), desde luego tambien puedes utilizar benzilpenicilina+ sulfato de estreptomicina.
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30 de octubre de 2006
Un excelente articulo, sencillo pero con informacion precisa solo me parece pertinente
hacer incapie en que el factor humano es un elemento critico en un laboratorio de procesado de semen, sobre todo en pequeños centros donde la falta de tecnificación nos lleva muchas veces a improvisar por ejemplo el criterio de evaluación de motilidad suele ser muy subjetivo de ahi que se recomiende que la misma persona realize siempre esta valoración y este mismo concepto es aplicable a todos los demas aspectos del procesamiento, es decir seleccionar al personal ideal, que se encuentre comprometido para seguir rutinariamente las normas de higiene y mantener los rangos de manejo dentro de las temperaturas ideales es un punto critico.
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Inti Veterinaris
28 de octubre de 2006
Quiza lo unico que le falta a este articulo para ser perfecto a mi juicio es que no se haya analizado el entrenamiento previo de los reproductores y su relación con los operarios de la sala de extracción y por otra parte, la dieta diaria y su formulación individualizada que recomiendan algunos especialistes.
Sobre este ultimo punto me encantaria saber la opinion del autor de este excelente articulo.
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27 de mayo de 2012
Es bueno el artículo; pero no se puede hablar de nada de esto si no se ha logrado un entrenamiento adecuado de los sementales, ese es el punto más critico, lo demás es más simple y teórico. Podemos decir mucho desde la teoría; pero muy poco desde la práctica...
Lo digo porque a un servidor le paso y el entrenamiento me retraso y complico, no podía seguri con lo demás y algo bien importante, en el entrenamiento no debemos apegarnos tanto a la higiene como si estuvieras diluyendo, la impreganción de una alfombra y dejarla ahí en el potro es lo mejor que puedo recomendarles en base a mi experiencia, lo demás no me resultó complicado,
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13 de junio de 2008
Primeramente felicitarlos por estos articulos que son muy ilustrativos y quien los lee se beneficiara de mucho para ganar experiencia en la vida profesional.
El uso de antibioticos para la desinfección del organo sexual masculino (verraco) no me parece el mas idoneo ya que estos pueden causar daños al animal. Debemos orientarnos a un manejo orgánico con agua hervida previamente se puede hacer el lavado o limpieza. Otro factor importante es la alimentación del cerdo ya que se obtendra semen de excelente calidad y que puede resistir al ataque de agentes patogenos. La persona que se encarge de la extracción del semen del cerdo debe estar diariamente con los animales ya que los cerdos se enseñan a un solo tipo de manejo al extraer el semen yasi la persona conoce el comportamiento del animal.
La limpieza del lugar donde se extrae el semen lavarlo luego de la práctica y finalmente adicionar al piso agua bien caliente para eliminar los causantes de posibles infecciones. Ojo el manejo orgánico debe ser ya utilizado para las diferentes prácticas pecuarias.
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PRONACA Procesadora Nacional de alimentos
10 de abril de 2008
Sin descuidar lo mencionado por los compañeros participantes en este foro, un punto muy importante que hay que cuidar para mí es el que tiene que ver con el personal que se dedica al cuidado de los reproductores. Muchas veces buscamos la respuesta a un problema sin encontrar solución, porque pensamos que todo está en el cerdo, pero que nuestro personal sea paciente, esté contento con su trabajo, que no tenga problemas que distraigan su atención, y sobre todo que se encuentre motivo, es un punto a nuestro favor para llevar por buen camino a un centro de inseminación.
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3 de abril de 2008
Uno de los principales puntos criticos en la calidad seminal de cualquier especie es tambien la presencia de infecciones en el tracto reproductivo que generan un importante aumento de ROS, (especies de oxigeno reactivas), mediado por la respuesta celular. lo que afecta de manera determinate en la motilidad espermatica, degenarion y fragmentacion de ADN espermatico como tambein defectos de naciemientos relacionados con fragmentacion de cromosomas (todo tipo, delecciones, etc).
En resumen la salud del tracto reproductivo del macho y de la hembra asi como las condiciones higienicas de laboratorio van de la mano.
Dejo abierto el debate con respecto a uso de doble guante, ya que existen verracos que solo se les puede extraer semen a mano desnuda..
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Farmbiocontrol
3 de abril de 2008
Lo primero agradecer al amigo Barrabés su comentario por lo que al artículo se refiere. No puedo estar más de acuerdo con el en lo tocante a la desinfección excesiva de las cuadras y los animales. De hecho, en el artículo se hace referencia a la limpieza de la sala de extracción tras cada jornada (con un barrido o agua a presión es suficiente) y a la limpieza semanal de la cuadra del verraco con el empleo de alguna sustancia desinfectante. La limpieza es el paso previo a la desinfección, pero no son lo mismo. No debemos obsesionarnos con esa asepsia total o corremos el riesgo de producir, efectivamente, el efecto contrario algo parecido a lo que algunos denominan el síndrome de la granja limpia.
¿Alguien conoce lugar más aséptico que un quirófano o una sala de cuidados intensivos? ¿Cómo es posible entonces que bacterias como el género Serratia sean responsables de tantas infecciones nosocomiales? Pues por eso mismo, porque con toda esa desinfección se seleccionan, al ser más resistentes que el resto, y libres de competencia proliferan hasta niveles patogénicos bacterias que de otra forma y en competencia con otras no causarían problemas. Es muy similar a la generación de resistencias en el caso de los antibióticos, es una simple cuestión de selección.
Por eso en las verraqueras y salas de extracción hay que mantener una adecuada limpieza y desinfección periódica, por supuesto, pero sin obsesionarse con ellas, al igual que con la flora cutánea natural del verraco, la cual es fácilmente controlable con unas adecuadas medidas de higiene y los antibióticos contenidos en los diluyentes.
En cuanto al laboratorio, sobre todo si existen máquinas, todo el material que entre en contacto con el semen si es de un solo uso mejor, y si no lo es aquí si que hay que desinfectar a conciencia si es con calor en la estufa a 120ºC pues mejor.
Un buen desinfectante que no deja residuos y es completamente biodegradable es la combinación de peróxido de hidrógeno con ácido peracético. Poniendo atención sobre este último pues con el tiempo puede producir corrosión de diversos materiales si se emplea en las cuadras. Aunque esto se ve compensado por su eficacia contra el biofilm que puede producirse en el interior de las gomas y conductos de las máquinas donde se acantonan este tipo de bacterias (una de las fotos de contaminación seminal del artículo corresponde a una infección por Serratia marcescens aislada en una bomba dosificadora).
Un saludo
Rafa
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