Comparación de tres métodos para evaluar la integridad acrosomal y viabilidad de espermetazoides porcinos criopreservados y su correlación con la capacitación in vitro

INTRODUCCIÓN

En el campo de la producción porcina, en los últimos años, se han realizado importantes avances en la utilización de tecnologías reproductivas, así como en la criopreservación y los métodos de evaluación del semen. El α- tocoferol juega un rol importante en la reducción del daño de membranas causado por la criopreservación, mejorando la movilidad e integridad de membranas [1]. La integridad funcional y física de la membrana plasmática del espermatozoide es esencial para la supervivencia celular y están relacionadas con la fertilidad [2].

Así mismo el estado del acrosoma puede ser usado para determinar el daño después del descongelamiento de una muestra [1]. De esta manera, la evaluación de la estructura y funcionalidad de las membranas espermáticas podrían ser buenas herramientas para valorar la capacidad fecundante del espermatozoide.

El objetivo de este trabajo ha sido estudiar en espermatozoides porcinos criopreservados con y sin α-tocoferol, la aplicación de tres procedimientos que permiten evaluar simultáneamente la integridad acrosomal y de membrana plasmática y su correlación con la capacitación in vitro.

MATERIAL Y MÉTODOS

Las muestras de semen porcino fueron congeladas en pastillas de 0,2 mL con o sin (control) el agregado de 200 μg/mL de α-tocoferol al diluyente de congelamiento y almacenadas en nitrógeno liquido a –196 ºC. Las pastillas se descongelaron en medio “Beltsville” (2:1 [pastillas: mL]) en baño térmico a 38ºC por 10 minutos [3], y posteriormente se evaluaron los siguientes parámetros:

Los niveles de capacitación se evaluaron por la técnica de clorotetraciclina.

Los resultados se expresaron como valor medio ± (D.E). La relación entre las diferentes técnicas y el nivel de CIV fue analizado usando los coeficientes de correlación de Pearson.

Resultados de la evaluación de parámetros espermáticos: motilidad, integridad acrosomal e integridad de membranas plasmáticas. Inducción de la capacitación in vitro. 

Las muestras criopreservadas en presencia de α-Tocoferol mostraron mayores niveles de motilidad, CIV e integridad de membranas.

Se observó una mayor correlación entre la técnica de Azul Tripan/DIC y el nivel de capacitación in vitro. No se observó correlación significativa con la técnica de PI/PSA.


DISCUSIÓN

La tinción de Azul Tripán, la cual es de fácil aplicación, puede considerarse un buen indicador de la funcionalidad espermática. Las particularidades de las membranas del espermatozoide porcino condicionarían el uso de ciertos colorantes fluorescentes para la evaluación de la integridad de membranas en esta especie.


BIBLIOGRAFÍA

[1] Jeong YJ y col. Effect of alpha-tocopherol supplementation during boar semen cryopreservation on sperm characteristics and expression of apoptosis related genes. Cryobiology 2009;58:181-9.
[2] Lee HL y col.A comparative study of Sephadex, glass wool and Percoll separation techniques on sperm quality and IVF results for cryopreserved bovine semen. J Vet Sci 2009;10:249-55.
[3] Breininger E y col.Alpha-tocopherol improves biochemical and dynamic parameters in cryopreserved boar semen. Theriogenology 2005;63:2126-35.
[4] Sukardi S y col. Simultaneous detection of the acrosomal status and viability of incubated ram spermatozoa using fluorescent markers. Anim Reprod Sci 1997;46:89-6.
[5] Jeyendran RS y col. Development of an assay to assess the functional integrity of the human sperm membrane and its relationship to other semen characteristics. J Reprod Fertil 1984;70:219-28.

Memorias del XI Congreso Nacional de Producción Porcina | Salta | Argentina | 2012