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Discusion creada el 01/06/2003

Kits de control de micotoxinas

Pregunta para las Empresas que comercializan o/y fabrican “Kits Elisa” para el control de micotoxinas en los alimentos para humanos, alimentos compuestos y materias primas utilizadas en la alimentación animal.

No hay duda que los “Kits Elisa” para el control de micotoxinas son rápidos, prácticos y económicos (comparados con otros métodos).
Sin embargo, y visto que aún se utilizan anticuerpos policlónales, se corre siempre el riesgo de dar “falsos positivos”, que después habrá que reconfirmar por otros métodos (por ejemplo, los que utilizan la cromatografía de líquidos de alta resolución, HPLC o los que utilizan la columna de inmunoafinidad previo a la HPLC), para no dar una interpretación errada a los resultados obtenidos en la muestra analizada.

¿Qué mejoras al respecto se han efectuado en esos “Kits Elisa”, para minimizar el problema antes referido?

Visto que la reconfirmación por HPLC puede no estar disponible en el laboratorio de control en cuestión que utilice “Elisa” o bien, resultar caro y tardar más tiempo el conocimiento de los resultados, si se manda analizar en otro laboratorio que esté preparado para tal fin.
La pregunta es: ¿no sería mejor primero utilizar (para esa muestra positiva), una columna de inmunoafinidad con anticuerpo monoclonal específico para la micotoxina que se está reconfirmando, y después utilizar “Elisa”?

Alberto Gimeno
Consultor Técnico en Nutrición Animal y Micotoxicologia (Potugal)
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Re: Kits de control de micotoxinas
06/06/2003 | Es claro que la técnica de ELISA es particularmente susceptible a dar resultados falsos positivos.
La "economía" de la técnica es relativa, ya que es necesario correr un set de muestras para que resulte viable económicamente (debido a que se deben correr 5 ó 6 estándares conjuntamente con las muestras).
Utilizar una columna de inmunoafinidad como paso previo de purificación aumentaría el costo por análisis en USD$12 (dólares) en promedio (ya no resultaría viable económicamente).
Lo más recomendable en técnicas rápidas y económicas sigue siendo la cromatografía en capa delgada, sobre todo los métodos multitoxina, que permiten detectar dos o más toxinas en una sola corrida.
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ALBERTO GIMENO
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Lisboa, Lisboa, Portugal
Ingeniero Industrial Químico
Re: Kits de control de micotoxinas
06/06/2003 | Apreciada Norma:
En la generalidad, yo apoyo el uso de la cromatografía en capa delgada.
No sé si habrá visto que en el artículo que publiqué en engormix.com sobre “Metodologías para el análisis de micotoxinas .....”, describo al principio de forma completa y detallada, un método de multidetección de micotoxinas por cromatografía en capa delgada, que parte de los métodos que ya publiqué al respecto en el JAOAC bastantes años atrás (desde 1979 .....). Incluso hoy día, los sistemas de purificación del extracto para posterior análisis por cromatografía en capa delgada, están significativamente mejorados y demuestran ser efectivos.
Vea también los comentarios que hago al final del artículo sobre la TLC, HPLC, columna de inmunoafinidad-HPLC y cromatografía de gases.
Sin embargo, la TLC no consigue (en algunas micotoxinas) para detectar concentraciones tan bajas como las que pueden detectar los otros métodos, incluso el de “Elisa”.
Ahora bien, respecto a mi pregunta:

1.- Agradezco su respuesta, pero yo no pregunto cuál es el método más recomendable en técnicas rápidas y económicas, ni tampoco estoy aconsejando “Elisa”, ni tampoco estoy entrando en el campo de la viabilidad económica.

2.- Mi pregunta está más dirigida a las empresas que fabrican o/y comercializan “Kits de Elisa”, porque según mi experiencia y a nivel mundial, cada vez son más los laboratorios que utilizan estos Kits, y que posteriormente no reconfirman las muestras positivas por los otros métodos.

3.- Hay grandes empresas productoras de alimentos compuestos y otras, productoras de productos derivados de la leche, donde los veterinarios van a las granjas de vacas lecheras y analizan en la propia granja la posible contaminación con aflatoxina M1 en la leche, utilizando “Elisa”. Solo que después y una vez más, las muestras positivas no se reconfirman, por ejemplo, con el método que utiliza la columna de inmunoafinidad previo a la HPLC (vea mi artículo).
Considero en este caso que el control que hacen esos veterinarios es un sistema muy práctico y provechoso que podría ser acompañado de una mejora, como sugiero en mi pregunta, para así minimizar el riesgo de “falsos positivos”, aunque resulte más caro.

4.- Lo del mayor o menor aumento de costo del análisis con el previo uso de las columnas de inmunoafinidad, es muy relativo, ya que el costo de estas columnas e incluso el de los “Kits de Elisa” es extraordinariamente variable dependendiendo del país.

Una vez más, le agradezco la respuesta y la atención que ha tomado a mi pregunta.


Alberto Gimeno
Consultor Técnico en Nutrición Animal y Micotoxicología (Portugal).
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Re: Kits de control de micotoxinas
11/06/2003 | Estimado Sr. Gimeno:

1. Entiendo perfectamente su pregunta. Mis comentarios simplemente dan contexto a la pregunta.

2. Di respuesta a su pregunta ya que mi empresa comercializa kits de ELISA, y comparto su opinión de que muchas empresas utilizan esta técnica para determinar micotoxinas. Sin embargo, el criterio de utilización que sugiero a mis clientes es claro: El ELISA, en el mejor de los casos, es una técnica de "screening", nunca una técnica analítica final.

3. El ELISA presenta problemas inherentes a la técnica per se, los cuales no se solucionan con una limpieza previa por inmunoafinidad. Estos inconvenientes incluyen el hecho de ser una técnica indirecta que no mide la micotoxina, sino la formación de un cromóforo (baja especificidad), y al hecho de no existir una relación lineal entre concentración de analito y absorbancia. Le sugiero que haga un ejercicio teórico aplicado a cualquier kit de ELISA: asuma que las unidades de absorbancia del lector varian en 0.1, ¿en cuanto varía la concentración de toxina? La variación es especialmente dramática cuando se están analizando toxinas de Fusarium, las cuales pueden ser encontradas en la naturaleza en ppm.

4. De acuerdo con nuestra experiencia en Latinoamérica, el costo no es tan relativo como Ud. sugiere (oscila entre 280 y 320 dolares por kit de 48 pozos). La necesidad de hacer un "pool" de muestras para que la técnica resulte viable económicamente, es algo fuera de cuestión, asi como lo es el incremento en el costo al usar una columna de inmunoafinidad adicional (en este caso el costo tampoco es relativo: oscila entre 10 y 13 dólares).

En realidad, no hay qué agradecer. Las discusiones técnicas alrededor del tema de las micotoxinas son parte de nuestro trabajo diario.

Saludos cordiales desde Colombia,


Norma Perilla
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