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Publicado: 17 de noviembre de 2003
Por: Alberto Gimeno
Este es uno de los Capítulos que pertenece al artículo completo titulado: Métodos de Análisis de Micotoxinas en Piensos Compuestos y Materias Primas (Revisión I).


F.1.- Cromatografia en capa fina

1.- Las técnicas de análisis por cromatografia en capa fina (TLC) continúan a ser utilizadas, mismo para métodos oficiales de análisis (13,14,64).


2.- Son económicas, rápidas y prácticas, en esencial cuando hay que analizar muchas muestras.

3.- Con ellas se pueden analizar simultáneamente varias micotoxinas al mismo tiempo en más de una muestra.

4.- En la multidetección se presenta el problema de la purificación, ya que es muy difícil que para varias micotoxinas al mismo tiempo se pueda apurar mucho una purificación, si se apura o se sofistica demasiado podemos tener problemas de recuperación. Un ejemplo de esto es lo de (18) en donde emplearon una excelente purificación a base de una diálisis del extracto en condiciones adecuadas, la eliminación de interferencias fue excelente del orden de un 95%, pero las recuperaciones fueron muy bajas en general y extraordinariamente bajas para alguna micotoxinas.

5.- El intentar aplicar la multidetección para una gran variedad de productos, también conduce a problemas de purificación, de forma, que el sistema de limpieza que se aplique será muy bueno para un tipo de productos y no será tan bueno para otro tipo. Sin embargo, estos sistemas son muy útiles para hacer un chequeo inicial de la muestra y que en muchos casos ya nos define bastante bien el como está el producto en cuestión.

6.- Todo esto se puede mejorar si aplicamos el estudio de la limpieza del extracto, a productos concretos y a micotoxinas concretas (análisis individual), ya que de esa forma se puede desarrollar una purificación especifica para ese producto y un análisis especifico para esa micotoxina (13,14). Claro que eso reporta más tiempo, más material y es más engorroso para una fabrica de piensos que tiene una gran heterogeneidad de productos.

7.- El otro problema es que para algunas micotoxinas, las concentraciones mínimas detectables de la micotoxina (microgramos/Kg o mg/Kg) en el alimento (análisis por TLC) son más altas que las que se pueden conseguir por los métodos que utilizan la cromatografia de líquidos de alta resolución (HPLC). Sin embargo, en la mayoría de los casos son suficientes, por lo menos en los alimentos para animales, ya que si consultamos recopilaciones de datos (65) para diferentes micotoxinas en lo que respecta a los niveles mínimos de micotoxina (según las pruebas de campo) que pueden provocar intoxicaciones crónicas, veremos que en algunos casos podemos detectar perfectamente concentraciones más bajas que esos niveles tóxicos

8.- De todas formas, la tendencia es cada vez más la de encontrar métodos de análisis que sean capaces de detectar (con fiabilidad) concentraciones de micotoxina cada vez más bajas y esto ocurre mucho en el análisis de alimentos para los humanos.

9.- Por otro lado, si tenemos en cuenta que debido a las zonas de microflora que pueden existir en un alimento y a otras causas, la micotoxina contaminante no se mezcla uniformemente en todo la masa alimentar y además las muestras de alimento no se sacan bien la mayoría de las veces ( no se cumplen las normas ni se tienen en cuenta los estudios que ya hay publicados para esos fines (66,67) ), estamos cada vez más de acuerdo en que debemos ir a conseguir una concentración mínima detectable de micotoxina lo más baja posible.




F.2.- Cromatografia de líquidos de alta resolución

1.- Las técnicas de análisis por cromatografia de líquidos de alta resolución (HPLC), están cada vez más a ser utilizadas y ya están aplicadas en muchos métodos oficiales (13,14,50,51).


2.- No son rápidas y son caras (más por lo del aparato de HPLC y columnas) y en especial cuando hay que analizar muchas muestras y varias micotoxinas, que deben ser por separado ya que estas técnicas no permiten la multideteccíon.

3.- Las purificaciones que se consiguen son muy buenas ya que después, la HPLC no permite purificaciones deficientes.

4.- Las concentraciones mínimas detectables de micotoxinas son a veces muy bajas o en general más bajas que por cromatografia en capa fina (para una misma micotoxina analizada por los dos métodos y comparando).

5.- El sistema de cuantificación con el detector de fluorescencia, proporciona resultados más exactos y con menos variabilidad que los obtenidos por los métodos de cuantificación (comparación con concentraciones conocidas de patrón, método de cuantificación por el limite inferior de comprobación, fluorodensitometria) utilizados en la cromatografia en capa fina.




F.3.- Cromatografia de inmunoafinidad y determinación por cromatografia de liquidos de alta resolución

1.- Las técnicas de análisis de micotoxinas que utilizan las columna de inmunoafinidad y después la cromatografia de líquidos de alta resolución (HPLC), están también a ser utilizadas cada vez más.


2.- Son relativamente rápidas y son caras (más por lo de las columnas de inmunoafinidad, aparato de HPLC y columnas de HPLC), en especial cuando hay que analizar muchas muestras y varias micotoxinas, que deben ser por separado ya que estas técnicas no permiten la multideteccíon.

3.- Las purificaciones que se obtienen, son muy buenas y son técnicas muy especificas para cada micotoxina en particular (gracias a la columna de inmunoafinidad).

4.- El uso posterior de la cromatografia de líquidos de alta resolución y detector de fluorescencia (ver comentarios anteriores en HPLC) completa la técnica de una forma muy buena.



F.4.-Cromatografía de gases

1.- Las técnicas que utilizan la cromatografía de gases son excelentes para el control de micotoxinas tricotecenas. Son bastante especificas para este tipo de micotoxinas.

2.- No son rápidas y son caras (más por lo del cromatógrafo de gases), sin embargo permiten la multidetección dentro de la susodicha familia de micotoxinas tricotecenas.

3.- Las purificaciones que se consiguen son muy buenas ya que después, la cromatografía de gases no permite purificaciones deficientes.

4.- Las concentraciones mínimas detectables de micotoxinas son a veces muy bajas o en general más bajas que por cromatografía en capa fina (para una misma micotoxina analizada por los dos métodos y comparando).

5.- El sistema de cuantificación con el detector de captura electrónica, proporciona resultados más exactos y con menos variabilidad que los obtenidos por los métodos de cuantificación (comparación con concentraciones conocidas de patrón, método de cuantificación por el limite inferior de comprobación, fluorodensitometria) utilizados en la cromatografía en capa fina.

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