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Discusion creada el 05/07/2008

Descongelación de semen ¿?

Deseo saber q piensan ustedes sobre la descongelación de semen a 45 grados centígrados por 15 segundos de las pajillas de 0,25ml, en comparación con la descongelación de 35 - 37ºC por 30-45 segundos, respecto a la motilidad y viabilidad de los espermatozoides post descongelación.

Me sugirieron descongelar el semen a la temperatura de 45ºC por 15 seg. por una cuestión de rapidez, pero me pareció muy peligroso para los espermatozoides pasar de -196ºC (tanque) a 45ºC (termo) y luego a 37ºC (en la siembra al interior de la vaca).

Ademas he escuchado q los diluyente del semen utilizado en el Perú no esta para una descongelación a esa temperatura (45ºC) y q los resultados de preñez obtenidos no son buenos agrego no más q al observar al microscopio la motilidad individual e intensidad del semen de una pajilla descongelada a esa temperatura era la misma, a mi parecer, q la observada con una descongelación de 35 - 37ºC por 30-45 segundos.

Gustoso esperaré sus comentarios y experiencias, muchas gracias de antemano.
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Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | En el Centro de Inseminación Artificial de la Universidad Austral de Chile recomendamos descongelar las pajuelas de semen de 0,25 ml (largas y finas) a 40ºC por 10, de donde me parece extraño aquello de que con mayor temperatura (45ºC) se deba usar más tiempo.

Patricio Molina (MV)
CIA-UACh
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Humberto Sánchez
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Torreon, Coahuila de Zaragoza, México
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Hola me gustaria me facilitaran mas informacion acerca de esto ya que es muy facil hacer recomendaciones sin mostrar un analisis real de estos resultados ya que es muy arriesgado y las fertilidades se mostraran muy afectadas
espero me puedan ofrecer algunos resultados ya que se están haciendo recomendaciones de 38°C 30 a 45 seg
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Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | En dias pasados cambie de inseminador, el es un medico veterinario zootecnista, y el para inseminar no utiliza ningún método de descongelamiento, y dice que eso es cosa del pasado, que estudios recientes demuestran que se debe de inseminar sin descongelar la pajilla. De hecho, el, en cuanto saca la pajilla del termo la toma y cubre con su mano , la traslada a la pipeta y después de ahí a la vaca. Curiosamente las vacas que a inseminado han resultado preñadas.

Tienen alguna informacion al respecto??? me gustaria recibir informacion y comentarios referentes a este tipo de aplicaciones.
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Roger Istebot
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Trinidad, Flores, Uruguay
Técnico Agropecuario
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | hola amigos.
yo hace 15 años que soy inseminador y con esto que les digo no quiere ser que sea lo mejor. Pero la experiencia que tengo con respecto a esto es que siempre he estado en el entorno de los 80% de preñez sobre vacas o vaquillonas inseminadas usando la técnica de 37º centígrados durante 40 segundos. Para mi forma de ver, creo que es importante pensar que cuanto menos golpes bruscos de temp tengan asi como diferentes variaciones, es mejor.
saludos a todos.
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Rodrigo Reyes P
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Managua, Managua, Nicaragua
Productor Ganadero
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Con los comentarios que he leido, he quedado mas confundido al fin cual es la temperatura adecuada?? cuanto tiempo???? o como dice uno de los expositores, no hay necesidad de descongelar????
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Benjamin Castilla Flores
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Berriozabal, Chiapas, México
Asesor Técnico
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Hola.
Descongelar a 45° o 40° a 10 o 15 segundos, es un riesgo que no es necesario, no veo el problema de esperar 20 segundos mas a una temperatura de 35 grados, si descongelas a 40 o 45 grados deber retirar la pajilla justo en el tiempo señalado y con el riesgo de sufrir un shock térmico si la temperatura ambiente no es favorable.
También se puede descongelar a 70° por 5 segundos sin causar daño celular aparente, pero insisto son riesgos innecesarios.
Sin embargo descongelar a 35°, te permite mantener la pajilla por mas tiempo en el termo si es necesario y si un riesgo mayor cuando el ambiente es desfavorable, solo en lugares sumamente fríos es aconsejable descongelar a 40° pero con sumo cuidado, lo mejor es valorar resultados atraves de los índices de fertilidad.
Yo he mantenido semen hasta por 40 minutos en termos a 35° sin alterar sin mayor alteración de la motilidad y viabilidad espermática.
Saludos
MVZ Benjamín Castilla
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Rodolfo Canseco Sedano
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Veracruz, Veracruz-Llave, México
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Hola. La mejor forma de descongelar el semen es en una temperatura de 35 a 37 grados centígrados durante 40 o 50 segundos. Si quieren probar otras temperaturas les recomiendo que descongelen el semen y luego lo dejen por lo menos una hora a 37 grados en baño maría y revísenlo cada 15 minutos para que se den cuenta después de una hora en que método sobreviven por mas tiempo los espermatozoides.

La IA es una técnica que aún se debe de difundir mas en nuestros países, y experimentando cosas sin probarlas no ayuda.

También he conocido personas que no descongelan. Efectivamente, a veces las vacas quedan preñadas, pero evalúen lo que pasa después de inseminar 100 vacas con semen descongelado y 100 con semen no descongelado para que vean con cual método quedan mas veces preñadas.

Saludos

Rodolfo Canseco Sedano
Facultad de Veterinaria
Universidad Veracruzana
Veracruz, México
yopo10@hotmail.com
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Luis Guevara
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Coro, Falcon, Venezuela
Médico Veterinario
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Deseo agregar un comentario al foro. La descongelación de semen es un proceso que se ha probado de muchas formas y ha tenido muchos estudios estadísticos de cual es el método ideal, en realidad no existe ya que hay una serie de factores que intervienen en la fisiología espermática natural y en en el proceso de congelación (uso de elementos que favorecen la congelación y protegen la célula espermática) que hacen imposible elegir un método único, lo que si esta claro es que el método que mejor ha funcionado es el 35-37°C a 45 Seg para todos los casos, es decir descongela la media o superior de la muestra en forma segura y viable y eso es considerado como bueno. Recomiendo, no inventemos investiguemos es decir establezcamos patrones de descongelación para diferentes tipos de congelación y sometamos los ensayos a pruebas estadísticas.
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Luis Carlos Leguizamon
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Bogota, Distrito Especial, Colombia
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Saludos.
La técnica de descongelación de semen ha tenido variadas investigaciones en cuanto al tiempo y temperatura de cualquier forma la mejor recomendacion es usar una temperatura de 37°C por 40 seg igual se puede descongelar a mayor temperatura por un tiempo mas corto no debe olvidarse es que el semen debe pasar por el menor estrés de temperatura que sea posible se puede descongela a 60°C por 5 seg pero si por algún motivo se presenta algún inconveniente al momento de la inseminacion seguramente el semen estara en muy malas condiciones para ser efectivo la temperatura de 37°C es la mas recomendable ya que por cualquier motivo de retraso en el proceso de inseminacion el semen seguira conservando sus cualidades por mas tiempo que si se mantiene en mayor temperatura lo importante es evitar al maximo los cambios en los picos de temperatura a los que generalmente el semen esta expuesto.

Gracias por su atencion.
Luis Carlos Leguizamon
Medico veterinario zootecnista
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Juan Carlos Montilla Velasco
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, , Venezuela
Ing. Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
30/12/2008 | Estoy de acuerdo con varios de los colegas expositores, en cuanto que es un riesgo innecesario aplicar una temperatura tal alta a las pajuelas, por no esperar 20-15 seg mas de tiempo. Lo cierto es que la experiencia de muchos de nosotros es que la descongelación deberá ser a 37º C / 30-40 seg, a fin de no comprometer la motilidad y vitalidad de los espermatozoides. recordemos que este tipo de célula es muy sensible a cambios bruscos de TºC (-196, 40, ) hasta que finalmente llegan al endometrio uterino con 37ºC por tanto no veo la aplicación de este tipo de descongelación.
Hace años vi una publicación de una empresa de semen recomendando descongelar las pajillas en el bolsillo de los pantalones, lo cual resulto ser un absurdo y ahora sale esto sin ningún basamento científico, que demuestre que la calidad seminal no se verá afectada con este método.
Por tanto no arriesgues un trabajo por ahorrarte 15 seg. sigue descongelando a 37ºC.
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adolfo zambrano
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Ciudad de Panama, Los Santos, Panamá
Ing. Agrónomo Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
31/12/2008 | Primero que todo saludos a todos y feliz año nuevo, con lo mejor de lo mejor para todos

Con todo el respeto el que inicio el foro no hace referencia a quien ni basado en que estudios le dieron esa recomendación.

Recordemos que se requiere de una curva de congelación (descenso de temperatura) para logra el mínimo de daños en los espermatozoides debido a la crioproteción y se requiere de una velocidad de asenso rápida para lograr el mínimo de daños durante la descongelación ,,la velocidad adecuada se logra en el rango de temperatura de 35 a 37grados centígrados , el tiempo mínimo requerido de las pajillas en el agua seria de 30 segundos mínimo en pajillas de 0.5 cc y de 15 segundos en pajillas de 0.25 cc con un máximo de permanencia de 15 minutos (por cualquier eventualidad) , después de este tiempo la viabilidad espermática y motilidad se ven afectadas significativamente, ahora recordemos de después de los 2 a 3 minutos después de la descongelación se inicia el descenso en las mismas.
Esto nos a dado buenos resultados en la Universidad de Panamá y en los personal en mis trabajos privados en campo desde hace ya 8 años.
El cambiar de protocolo no debe de ser basado en me dijeron , sino en estudios con pruebas estadísticas.
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ANGEL RAFAEL GARRIDO OTERO
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Sahagun, Cordoba, Colombia
MEDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA
Re: Descongelación de semen ¿?
01/01/2009 | Método para descongelar el semen
Yo recomiendo seguir las siguientes instrucciones, ya que la descongelación del semen dependerá del método de congelación usado previamente. Sin embargo, el método más usado y que proporciona mejores resultados es la descongelación en agua entre 35 y 37°C. Consiste en sumergir totalmente a la pajuela en agua a una temperatura de 35 a 37 °C, durante 40 segundos.

Se debe verificar la temperatura del agua cuando se va a descongelar más de una pajuela. Esta descongelación debe hacerse una por cada vez.

Se debe verificar el buen funcionamiento del termómetro, comparando su lectura con otro en forma periódica.

Luego de descongelada la pajuela se extrae, tomándola por uno de los extremos.

Se seca con una toalla de papel desechable.

Se verifica la identificación de la pajuela y se examina por quebraduras o grietas en la pajuela.

No deben usarse pajuelas defectuosas o sin identificación.

Se carga la pistola de acuerdo con el equipo que se disponga.

Corte el extremo de la pajuela con el corta pajuelas, cuyo corte debe ser limpio y recto.

Compruebe el deslizamiento del émbolo. Presiónelo hacia arriba hasta ver que el semen desplace el espacio de aire en el extremo de la pajuela.
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Joel Enrique Berrio Montiel
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Chigorodo, Antioquia, Colombia
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
02/01/2009 | HOLA .....UN SALUDO DESDE URABA COLOMBIA ...UN FELIZ AÑO NUEVO A TODOS LOS COLEGAS QUE PARTICIPAN DE ESTE INTERESANTE FORO, CON EL RESPETO QUE DEBEN MERECER TODOS LOS CONCEPTOS Y RECOMENDACIONES QUE AQUÍ SE EXPONEN QUISIERA PARTICIPAR PARA REAFIRMAR A O APOYAR LO QUE LA MAYORÍA DE LOS PARTICIPANTES HA EXPUESTO CON LOS FUNDAMENTOS O SOPORTES CIENTÍFICOS Y CON EL NUMERO DE REPETICIONES SUFICIENTES PARA DECIR QUE ES EL MÉTODO QUE CAUSA MENOR DAÑO A LA BIABILIDAD ESPERMÁTICA Y ESTADÍSTICAMENTE HA MOSTRADO MEJORES PORCENTAJES DE PREÑEZ EN CAMPO QUE ES LO QUE AL FINAL NOS DEBE INTERESAR ( AGUA A 35-37º POR 40-45 SEG), PERO TAMBIÉN ESTOY DE ACUERDO EN QUE SE SIGA INVESTIGANDO Y APLICANDO OTROS MÉTODOS, FORMAS, TEMPERATURAS Y TIEMPOS DE DESCONGELACIÓN CON MUCHA SERIEDAD APLICANDO LOS CRITERIOS CIENTÍFICOS DE LA INVESTIGACIÓN CON ESTADÍSTICAS Y REPETICIONES SUFICIENTES QUE DEMUESTREN QUE LO QUE HOY DEFENDEMOS LA MAYORÍA COMO EL MÉTODO MAS CONVENIENTE PARA DESCONGELAR SEMEN ES OBSOLETO Y EXISTE OTRO MEJOR QUE GARANTIZA MEJORES RENDIMIENTOS CON MENOR TIEMPO, QUIEN QUITA QUE ESTEMOS ERRADOS, PERO HASTA QUE NO NOS DEMUESTREN LO CONTRARIO LE SUGIERO MUY RESPETUOSAMENTE AL COMPAÑERO QUE INICIO EL FORO CON SU INQUIETUD QUE SIGA UTILIZANDO EL TRADICIONAL 35-37º X 40-45 SEG. GRACIAS Y QUE DIOS LOS BENDIGA.....
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Alvaro Arias
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Bogota, Cundinamarca, Colombia
Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
04/01/2009 | Complemento, a exposiciones anteriores:
La fertilización no es simplemente la penetración del espermatozoide en el oocito, es un proceso bioquímico que se inicia con el reconocimiento entre los dos gametosy termina con la fusión de cromosomas masculinos y femeninos.
Desde hace medio siglo se ha investigado por el óptimo protocolo de descongelación para el semen de varias especies, sería imposible citar todas las referencias a través de este medio. La mayoría de estudios indican que el mejor método es la descongelación rápida en agua entre 35 y 37 grados centígrados, 20 segundos para pajillas de ¼ cc y 0.3 cc, y 40 seg para las de ½ cc. prueba de ello es lo que recomiendan casi todas las productoras de semen, también es el protocolo básico para otros estudios como diferencia entre diluyentes y diferentes agregados al semen, practicas reproductivas y muchas otras. Citemos unos ejemplos: Efectos de la descongelación simultanea de múltiples pajillas de semen de 0.5ml y la secuencia en la inseminación, sobre las tazas de concepción en ganado lechero (articulo original : J Dairy Sci, December 1, 2006 89(12): 4723 - 4735.) . Método de descongelación y su interacción con diferentes toros, tipo de diluyente y sus efectos sobre la motilidad espermática y tazas de concepción (articulo original: J Dairy Sci 2005 88: 3868-3875)
No significa absolutamente nula concepción si se descongela a 45 grados centígrados o en el bolsillo del pantalón como lo menciono alguien, Claro que hay probabilidad de preñez pero va a ser más baja.
El método Standard rápido de 35 a 37 grados además permite más flexibilidad, para eventuales inconvenientes y retrasos por estar más cercano a la temperatura corporal.

Lo que más puede afectar la viabilidad del semen son los DESCENSOS EN TEMPERATURA DESPUÉS DE HABERSE DESCONGELADOy esa viabilidad disminuye a medida que la temperatura desciende por debajo de 35 grados c

Podemos encontrar gran motilidad espermática después de algunas horas PERO la viabilidad puede ser muy baja porque los descensos en temperatura después de la descongelación producen daño Acrosomal por cambios en la osmolaridad. Después de este daño los espermatozoides afectados no tendrán reacción acrosomal que es el paso crítico en la fecundación de muchas especies incluyendo los bovinos y por lo tanto Estos espermatozoides serán incapaces de fecundar.

Acrosoma: es un gorrito o vesícula en la cabeza del espermatozoide, en el se encuentran gran cantidad de enzimas y proteínas,
En ese momento crucial de la fecundación ocurre la fusión de las membranas plasmáticas de ambos gametos femenino y
masculino.
Mecanismo de la reacción acrosómica en un breve resumen,

Esencialmente, un componente gelatinoso del oocito interactúa con la membrana plasmática del espermatozoide, induciendo un incremento del pH intracelular y una despolarización dependiente del calcio. El cambio de pH causado por un flujo de hidrogeniones y un influjo de sodio es calcio dependiente. Tanto el incremento de pH como la despolarización de la membrana permiten la activación de canales de calcio de la membrana plasmática, permitiendo un influjo masivo de iones calcio. Este alto nivel del calcio intracelular induce la fusión de la membrana acrosomal externa con la membrana plasmática circundante y la liberación del contenido acrosomal.
Que conclusión podríamos sacar,
La temperatura más recomendable de descongelación es de entre 35 y 37 grados centígrados.
Evitar descensos en la temperatura luego de haber descongelado para evitar daño acrosomal.
La sola motililidad no es un índice de viabilidad

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Roberto Sevilla Leon
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Benito Juarez, Tabasco, México
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Descongelación de semen ¿?
04/01/2009 | en cuanto a los métodos convencionales para descongelar semen son buenos siempre y cuando las temperaturas de descongelando sean las adecuadas una de ellas es la temperatura interna de la vaca, pues las temperaturas elevadas y aunado el tiempo provocan shock térmico por consiguiente la muerte del espermatozoide. en lo personal el método que tengo para inseminar es directo del termo al aparato rep. y e tenido buenos resultados
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William Reynoso Mantilla
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Bosconia, Cesar, Colombia
Biologo de la Reproduccion Animal
Re: Descongelación de semen ¿?
05/01/2009 | Hola colegas. les deseo un feliz año.
Les comento que de alguna forma todos los comentarios son validos. la forma y la manera de descongelar las pajilla ha tomado tantas técnicas y procedimientos diferentes debido al fabricante de las pajillas y al existir un sin numero de productores de pajillas congeladas hasta de manera artesanal.
Todo depende de la concentración de GLICERINA que contenga el diluyente de la pajilla. normalmente se utiliza al 5% de glicerina pero este dato no es tomado en cuenta por muchos productores de semen.
La GLICERINA tiene la función de ser un protector de membranas celulares para evitar daños tanto en el proceso de congelación gradual como el de descongelación que es el mas peligroso ya que ocurre el fenómeno de CRIOFRACTURA de membrana. Cabe recordar que la crio fractura se utiliza en Histocitologia como una técnica microscópica tanto óptica como electrónica para observación histológica.
Por eso recomiendo al fabricante de semen congelado y de embriones que porcentaje de glicerina utiliza a mayor concentración resiste los choques térmicos y por eso hay técnicos que descongelan las pajillas en la boca en la axila o a temperatura ambiente. A menor glicerina hay que respetar la descongelación gradual a diferentes grados de temperatura y tiempos, en este caso de menor a mayor. Gracias y saludos a todos.
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Re: Descongelación de semen ¿?
26/01/2009 | Hola a todos, creo que el descongelado de las pajuelas es un paso fundamental en el mantenimiento de la fertilidad de los espermatozoides. tengamos en cuenta que estos son manoseados desde que se obtienen con vagina artificial o electroejaculador, pasan por un laboratorio donde los someten a diferentes estudios, luego le agregan una serie de diluyentes para su conservación y van descendiendo la temperatura siguiendo una curva de enfriado para no alterados hasta que llegan a los termos tanques de nitrógeno líquido a 196° C. Luego son vendidos a los productores y llegan a los inseminadores, que se preguntan ¿ A que temperatura es mejor descongelar las pajuelas? Cuanto tiempo? Yo creo que hay bastantes trabajos publicados de pajuelas descongeladas a 40-45° C a 10 o 15 segundos con resultados muy buenos, como otros que descongelan a 34, 35 o 37 °C con resultados excelentes. Yo hace años descongelaba a 35 o 37 °C durante 45 segundos a 1 minuto, ahora lo hago a 34 °C durante 1 minuto porque los espermatozoides a esa temperatura mantienen el metabolismo bajo. Por otro lado lo importante es la fertilidad y no el tiempo en que inseminé, por eso no veo la razón de hacerlo a 40 °C en 10 segundos.
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Uruguay
Re: Descongelación de semen ¿?
09/02/2009 | Estimado Hernández:
Soy inseminador desde hace ya 20 años en Uruguay y utilizo el método que usa tu veterinario desde tiempo atrás.
Debes tomar en cuenta que se recomienda en forma general el descongelamiento en un rango de 38 a 40 grados por un plazo aproximado de 10 segundos.
Si tomas la pajilla tal como sale del Termo -196ºC, la colocas en el inyector y la pones en tu mano por una plazo mayor, lo que estás haciendo es descongelarla en el mismo rango de temperatura, ya que tu cuerpo tiene esa temperatura.
Yo personalmente, hago lo mismo y mientras tomo el servix mantengo el inyector debajo de mi brazo, al inseminar ya está descongelado el semen y lo que pueda faltar lo descongela la temperatura interior del útero
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Benjamin Castilla Flores
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Berriozabal, Chiapas, México
Asesor Técnico
Re: Descongelación de semen ¿?
19/02/2009 | hola
Algunos comentarios me parecen muy acertados, sin embargo quiero comentar que el tiempo de descongelación de semen indica el espacio de tiempo mínimo requerido para reactivar el metabolismo celular que seria de 30 segundos, durante este tiempo y a temperatura de 35 grados cuando se supone salta la etapa critica de daño acrosomal no significa que los espermas estan totalmente viables, esta reportado un daño inevitable del 30 al 50 % de células durante este momento, asi que es conveniente utilizar el método que cause el menor daño posible,y comparando todos los métodos conocidos se ha llegado a la conclusión que este es el mejor en la mayoría de los casos.
Después de descongelar durante estos 30 segundos el daño que ocurra posteriormente sera mucho menor que durante la curva de descongelamiento critica, por ello el daño sucedido durante este paso ya esta hecho, y es posible prolongar momentáneamente el tiempo de inseminacion si se conserva la dosis descongelada a una temperatura constante de 35º.
Saludos
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Alvaro Paolini
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Barinas, Barinas, Venezuela
Ingeniero de Producción Animal, especialista en reproducción
Re: Descongelación de semen ¿?
20/02/2009 | He leído algunos de los comentarios de los foristas y estoy de acuerdo con algunos y en desacuerdo con otros en cuanto a varias cosas, en primer lugar, la pregunta era sobre pajillas o pajuelas de 0,25 cc, es importante acotar que estas pajillas son de un diámetro menor que la pajilla convencional de 0,5 cc, por lo tanto se va a descongelar más rápidamente, la temperatura que se debe usar es de 35 a 37 grados centígrados por un tiempo de 40 segundos a 1 minuto, pues se han realizado varios trabajos para ver las diferencias con los métodos y las temperaturas y solo este a funcionado. Si no descongelamos se corre el riesgo de quemar el cérvix del animal y producir prostaglandina que disminuya el % de concepción, por otro lado si lo descongelamos en la mano aun cuando tengamos la temperatura, el descongelado es desuniforme y se pierden muchos espermatozoides, etc.
Voy a buscar los artículos científicos donde están las explicaciones y los resultados de las pruebas y se los hago llegar
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