Nota Técnica: sensibilidad y especificidad de la prueba simple de tuberculina e interferón-gama (BOVIGAM®) para el diagnóstico de tuberculosis bovina

La prueba intradérmica simple con tuberculina PPD bovina es usada en el mundo entero para la detección de la tuberculosis bovina en el ganado.  Esta prueba sirvía para erradicar la tuberculosis bovina en países de Europa y en la mayoría de los estados de los Estados Unidos.  Sin embargo, la prueba tiene sus desventajas. Estudios previos estiman la sensibilidad de la prueba de tuberculina esta en un rango de 68-95%, mientras que la especificidad varía de 96 a 99% (1).  La sensibilidad de la prueba de tuberculina es afectada por la potencia y dosis de tuberculina administrada, el tiempo post-infección, inmunosupresión, post-parto y el intervalo de variación del observador (1).  Como resultado, la prueba no logra identificar todos los animales afectados con tuberculosis.  Además, la eespecificidad está influenciada por la sensibilización previa del ganado con otras bacterias como M. avium, M. paratuberculosis y demás micobacterias del medio ambiente.  Por tales motivos, la prueba de tuberculina genera falsos positivos estimado en un 1-4% de los animales probados.

El uso de la prueba de tuberculina comparativa mejora la especificidad.  Esta prueba comparativa consiste en aplicar la prueba de tuberculina con una PPD bovina y una PPD aviar. Se considerara reactor positivo aquel animal con 4 mm o mas de respuesta a la PPD bovina que a la PPD aviar.  La  prueba de tuberculina tiene varios inconvenientes de logística dentro de la finca.  Los animales deben ser inmovilizadas en dos ocasiones: una vez para la aplicación de la prueba y luego 72 horas después para la lectura de la prueba.  Otra desventaja es la desensibilización a la prueba intradérmica PPD;la repetición de la prueba de tuberculina solamente se recomienda después de un lapso de 60 días (1).

El interferón gamma (IFN-gamma) o BOVIGAM^® es una nueva prueba de laboratorio para el diagnóstico de tuberculosis bovina.  Esta prueba fue introducida en el año 1988 y actualmente es utilizada alrededor del mundo como prueba principal o auxiliar en el diagnóstico de la enfermedad del ganado.  La prueba se basa en la detección de la secreción de la citoquina IFN-gamma por las células del sistema inmunológico del animal. El BOVIGAM^® requiere de sangre completa heparinizada de los animales sospechosos.  Esta sangre se incuba con los antígenos altamente específicos de tuberculina PPD bovina y PPD aviar.  A continuación, un ELISA de captura determina la cantidad de IFN-gamma en el plasma.  La infección de tuberculosis reflejará una secreción de IFN-gamma en respuesta al antígeno de PPD bovina mayor que a la PPD aviar.  

El BOVIGAM^® tiene ventajas importantes sobre la prueba de tuberculina.  Primero, por ser una prueba comparativa su especificidad es mayor comparada con la prueba de tuberculina simple. Además, los animales son inmovilizados una sola vez para la toma de la muestra de sangre. El BOVIGAM^® se ha ensayado ampliamente en más de 200,000 cabezas de ganado en Australia, Brasil, Irlanda, Irlanda del Norte, Italia, Nueva Zelanda, Rumania, España y los Estados Unidos.  La sensibilidad varía del 82% al 100% para los animales confirmados por cultivo de tuberculosis bovina y la especificidad varia 98% y 100% (2, 3, 4). Otra ventaja importante es que el BOVIGAM^®detecta la infección por M. bovis mucho antes que la prueba de tuberculina intradérmica entonces es útil para detectar animales recién infectados que todavía no responden a la prueba intradérmica con tuberculina PPD bovina.  Finalmente, se ha demostrado que la prueba de  IFN-gamma identifica como positivos aquellos animales que resultaron anérgicos a la prueba de tuberculina PPD intradérmica (2,3,4).

Experiencia previa con INF-gamma (BOVIGAM^®) en Panamá.

Durante la campaña de la erradicación de tuberculosis bovina en la provincia Bocas de Toro en los años 1997 hasta 1999 se realizó la primera evaluación científica de la prueba INF-gamma en Panamá.  Para ello, la Dra. Cecilia Escobar del MIDA aplicó la prueba de tuberculina PPD, y la prueba de BOVIGAM^® en 422 animales proveniente de fincas con tuberculosis confirmada. De estos animales, 140 vacas salieron positivos para uno o ambas pruebas. La prueba de tuberculina detectó 64 (15,2%)  animales reactores (con aumento de grosor de piel de 4 mm o más). La prueba de BOVIGAM^® detectó 108 animales (25,6%) como positivos a la infección con  M. bovis y 32 reses resultaron positivas para ambas pruebas. Se enviaron al matadero 53 vacas para una inspección post-mortem. Se tomaron de estos animales muestras al nivel de matadero para confirmar la tuberculosis bovina por cultivo, histopatología y amplificación de ADN por PCR en biopsia.  Como estándar de referencia y para el cálculo de la precisión del diagnóstico de tuberculina y BOVIGAM^® se considera animales positivo por cultivo y/o por histopatología y/o por PCR como “verdaderos positivos”. Los animales sin prueba confirmativa al nivel de matadero se consideraron como “verdaderos negativos” por la tuberculosis. Los resultados de este estudio mostró para la prueba de tuberculina PPD y BOVIGAM^®  diferencias significativas de la sensibilidad (60.7% y 78.6% respectivamente) y la especificidad (48% y 72% respectivamente), el valor predictivo positivo (56.7% y 75.6% respectivamente) y valor predictivo negativo (52.2% y 75% respectivamente). Este estudio concluyó que la prueba de tuberculina tiene una sensibilidad inferior a la prueba de BOVIGAM^® para el diagnóstico de vacas confirmadas por la tuberculosis bovina. Además, la prueba simple de tuberculina es poco específica y  aproximadamente un 44%  de los animales que responden a esta prueba son falsos positivos.

Experiencia previa con INF-gamma (BOVIGAM^®) en Venezuela.

La prueba BOVIGAM^® fue utilizada en una finca de Venezuela con tuberculosis confirmada entre 1999 y 2000.  En un rebaño de 80 toros Bos Taurus subsp. Santa Gertrudis, 17 animales resultaron positivos a la prueba de BOVIGAM^®. Nueve animales fueron confirmados por el cultivo. Sin embargo, solamente dos animales del mismo rebaño resultaron positivos al PPD y BOVIGAM^®, de los cuales 1 fue confirmado por cultivo.  Este estudio determinó, basado en la confirmación de tuberculosis bovina por cultivo, que la prevalencia de tuberculosis basada en solamente la aplicación de tuberculina fue 1.2% en este rebaño. Por otro lado, la aplicación de BOVIGAM^® determinó la prevalencia en 11%. En otra investigación en un rebaño de 302 vacas, un total de 18 animales reaccionaron positivos con la prueba de BOVIGAM^®. . De estos animales positivos, 7 fueron confirmados al nivel de matadero y resultaron positivos por el aislamiento de M. bovis.  En este estudio, en el mismo rebaño ningún animal respondió a la prueba de tuberculina PPD. Ambos estudios en Venezuela demostraron claramente que la prueba de BOVIGAM^® tiene una sensibilidad superior para la detección de tuberculosis bovina sobre la prueba de tuberculina.

 

A medida que la prevalencia de la enfermedad disminuye y que el programa de control y erradicación avanza, el número de animales falsos positivos se incrementa a causa de la baja especificidad de la prueba simple de tuberculina, y por eso la proporción de animales sanos que se sacrifican resulte mayor. Por lo tanto, el uso de prueba de tuberculina dependerá de la fase de control y erradicación en cada región.  Esta situación no le conviene al productor ni a la credibilidad del médico veterinario y estudios demuestran que al final de la campaña de erradicación de TB bovina,  es necesario el uso técnicas más sensibles y específicas. Por esta razón existe la necesidad de realizar un diagnóstico diferencial entre animales infectados por Mycobacterium bovis y aquellos sensibilizados a la tuberculina por exposición a otras micobacterias. La prueba de Interferón gamma ha demostrado ser una excelente técnica. Además, esta prueba es capaz de detectar animales de infecciones tempranas o animales recientemente infectados con M. bovis  antes de que se conviertan en una fuente de infección para otros animales.  Este es un método para el diagnóstico de la tuberculosis bovina, que se caracteriza por su rapidez, sensibilidad y sencillez.