Diagnostico de tuberculosis bovina a partir de lesiones sugestivas de tuberculosis mediante el uso de histopatologia y reaccion en cadena de la polimerasa en tiempo real

La tuberculosis (TB) en humanos y animales continúa siendo un problema de salud a nivel mundial a pesar de las estrategias de control y erradicación que se han implementado. La TB es una enfermedad bacteriana, crónica y debilitante causada M. tuberculosis en humanos y en los animales por Mycobacterium bovis (M.bovis) caracterizada por la formación de granulomas frecuentemente observados en nódulos linfáticos (cabeza y tórax), pulmones, intestinos, hígado, bazo, pleura y peritoneo. En países desarrollados M. bovis es el agente causal en el 10% de casos de tuberculosis en humanos. Si bien M. tuberculosis se considera principalmente un patógeno humano, algunos estudios han informado de aislamiento de M. tuberculosis en ganado bovino reportándose desde un 4,7 % a un 30,8 % en África y en algunos países asiáticos (CDC 2011). El diagnóstico de la TB bovina sigue siendo un reto importante, ya que las herramientas de diagnóstico disponibles tienen limitaciones en cuanto a sensibilidad y especificidad que afectan a la detección de los animales infectados, esta acción retrasa en parte el avance de los programas de control y erradicación de la tuberculosis. Recientemente, las técnicas que utilizan el RT-PCR se han convertido en la herramienta molecular más utilizada para la detección y diagnóstico de micobacterias debido a su alta sensibilidad y especificidad a partir de una gran variedad de muestras biológicas.

 

Las muestras de tejidos fueron colectadas durante 4 meses en dos rastros de Baja California: 1) el rastro tipo inspección federal #54 ubicado en Carretera a San Felipe Km. 9.5 en el municipio de Mexicali, Baja California, 2) el rastro municipal de Ensenada ubicado en calle México s/n en fraccionamiento Valle Dorado. La inspección post-mortem se llevó a cabo en órganos, tejidos, y ganglios linfáticos en las regiones de la cabeza, tórax y abdomen, misma que fue realizada por el médico veterinario sanitarista aprobado por la SAGARPA siguiendo la Norma oficial mexicana (NOM-009-ZOO-1994).

Se colectaron muestras de ganglios linfáticos, órganos y tejidos con lesiones sugestivas de TB de aproximadamente 2.5 cm, fueron depositadas en un recipiente con formol al 10% (80 ml aprox.) en una proporción de 1:10, para realizar estudios histopatológicos, además se colecto una muestra de tejido fresco de 2 cm en bolsas estériles para estudios moleculares, posteriormente las muestras fueron enviadas a las instalaciones del Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias de la Universidad Autónoma de Baja California.

El análisis de información incluyó la estimación de Odds Ratio, Intervalos de Confianza de 95% y chi cuadrada, para determinar si los casos de TB resultaron asociados con la finalidad zootecnica (carne-leche) de los animales sacrificados. Los casos de tuberculosis (TB) fueron definidos como todas aquellas muestras con resultados positivos en el examen histopatológico (micobacteriosis).

 

Durante el periodo de febrero 2014 a mayo 2014 se sacrificaron un total de 11, 959 bovinos (10,011 en el rastro TIF No. 54 y 1948 en el rastro municipal de Ensenada). El 88% (10,566) fueron bovinos de carne y el resto fue ganado lechero. Del total de animales sacrificados, el 1.35% (162/11959) fueron detectados con lesiones granulomatosas sugestivas de TB. Durante este estudio se detectó una prevalencia de TB del 1.01% (121/11959) en base a estudios histopatológicos. Esta cifra es mayor a la reportada por López y colaboradores (1995) quienes detectaron una prevalencia de TB en los rastros del estado (estudios histopatológicos) de 0.12%. Estas diferencias tan marcadas en la prevalencia de 1995 al 2014 acentúa la necesidad de que los autores involucrados en las campañas de control y erradicación en el estado revisen y evalúen sistemáticamente los programas de prevención y control que están siguiendo en la lucha contra esta enfermedad. En cuanto al fin zootécnico, la frecuencia de TB en ganado de leche fue de 0.04% (69/1393) mientras que en el ganado de carne fue de 0.004% (52/10566). Los casos de TB se detectaron 10 veces más en ganado lechero que en ganado de carne (OR= 10.53; 95% IC= 7.3, 15.17; P< 0.00). En cuanto a la frecuencia por región, en Mexicali se encontró una prevalencia del 0.52% (53/10,011), mientras que en Ensenada fue de 1.74% (34/1948). Es decir, durante este periodo existieron 3 (OR= 3.3; IC95% 2.16-5.14; valor p < 0.05) veces más probabilidad de que una muestra de Ensenada presentara TB con respecto a Mexicali, este comportamiento es claro ya la TB es una enfermedad que tiende a la cronicidad y en el rastro de Ensenada se sacrifican las vacas lecheras de desecho (3 o 4 partos) de las cuencas de Tijuana y Tecate, mientras que en Mexicali se sacrifican animales cuyo fin zootécnico es para la producción de carne.

 

Cuadro 1. Magnitud de asociación entre los casos de TB y la finalidad zootécnica.

 

Un total de 60 muestras de TB fueron analizadas por medio de RT-PCR, el 48% (29/60) fueron casos de Mycobacterium bovis; el 17% (10/60) fueron casos de Mycobacterium tuberculosis y el 35% fueron. Todos los casos de Mycobacterium tuberculosis fueron encontrados en el municipio de Mexicali. En nuestro trabajo fue posible identificar por medio de técnicas moleculares (RTPCR) M. bovis y M. tuberculosis. Este es el primer trabajo en la región donde se documenta la presencia de M. tuberculosis en muestras de lesiones sugestivas de TB en muestras de ganado bovinos. Diversos estudio han identificado a M. tuberculosis en muestras de ganado bovino en algunos casos hasta el 27% (Amenin 2011, Berg 2009, Sulieman 2002,). Este hallazgo representa una preocupación seria por las implicaciones zoonoticas ya que M. tuberculosis se presenta en mayor proporción en ganglios linfáticos mediastínico como consecuencia de la inhalación ya que esta representa la principal ruta de transmisión de animal a animal (Ameni 2011).

 

Ameni G., M. Vordermeier, R. Firdessa, A. Aseffa, G. Hewinson,S. V. Gordon, S.Berg.2011.Mycobacterium tuberculosis infection in grazing cattle in central Ethiopia.The Veterinary Journal 188:359–361

Berg, S., R. Firdessa , M. Habtamu, , E. Gadisa, , A. Mengistu, L. Yamuah, , G. Ameni, M.Vordermeier , B.D. Robertson, N.H. Smith, H. Engers, D. Young, R.G. Hewinson, A. Aseffa , S.V. Gordon. 2009. The burden of mycobacterial disease in Ethiopian cattle: implications for public health. PLoS ONE 4, e5068.

Emerging Infectious Diseases (CDC). 2011. Humans as Source of Mycobacterium tuberculosis Infection in Cattle, Spain. Vol. 17, No. 12.

López, G., J. Hernández de Anda, E. Sierra.1997.Diagnostico post mortem en decomisos sugestivos a tuberculosis en ganado bovino sacrificado en rastros en Baja California. Vet.Mex., 28 (3).

NORMA Oficial Mexicana (NOM-009-Z00-1994), Proceso sanitario de la carne. Diario Oficial de la Federación, México, D.F.

Sulieman, M.S.H.M.E., 2002. Identification of acid-fast bacteria from caseous lesions in cattle in Sudan. Journal of Veterinary Medicine B 49, 415–418.