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Sensibilidad a diferentes antimicrobianos de salmonella typhimurium aisladas de huevo de consumo humano

Publicado: 2 de septiembre de 2011
Por: Mario Soria y Dante Javier Bueno, INTA EEA Concepción del Uruguay, Entre Ríos, Argentina
Resumen

Se evaluó la susceptibilidad a antimicrobianos de Salmonella enterica subespecie enterica serovariedad Typhimurium (ST) aisladas de cáscara y clara y/o yema, de huevos comercializados Los antibióticos ensayados son de uso en medicina humana y veterinaria. Se observó que el 100% fueron sensibles a gentamicina (CN), norfloxacina (NOR), ciprofloxacina (CIP), imipenem (IMP) y amoxicilina-acido clavulánico (AMC), mientras que para doxiciclina (DOX), tetraciclina (TE) y estreptomicina (S) se obtuvo una resistencia de 68,1%, 93,6% y 97,9% respectivamente. El 98% de las cepas estudiadas presentó resistencia a dos o mas antimicrobianos pertenecientes al mismo o distintos grupos de antibióticos. No se observó multiresistencia en el grupo de las quinolonas y fenicoles. Dada la importancia de ST en la salud pública y su multiresistencia a diferentes antibióticos, toda terapia antimicrobiana frente a este agente debe considerar en la misma a CN, NOR, CIP, IMP o AMC.
Palabras Clave: Salmonella Typhimurium, Antimicrobianos, Huevos, Entre Ríos, Argentina.

Introducción
El género Salmonella spp. está constituido por microorganismos ampliamente distribuidos en todo el mundo (Ruiz B et al., 2006). Aproximadamente 2000 serotipos de Salmonella han sido asociados con enterocolitis, siendo Salmonella entérica subespecie enterica serovariedad Typhimurium (ST) y Salmonella enterica subespecie entérica serovariedad Enteritidis (SE) los principales agentes etiológicos de salmonelosis transmitidas por alimentos en humanos (Yang et al., 2002) La mayoría de las infecciones por Salmonella spp. resultan de la ingestión de carne de pollo, de res, de cerdo, huevos y leche contaminados (Ruiz B et al., 2006). El impacto en la salud pública de infecciones por ST se está incrementando, debido a la aparición de resistencia a antimicrobianos por parte de este serovar, relacionado a la circulación de clones multiresistentes (Graziani et al., 2007). La principal causa de bacterias resistentes es el excesivo uso de antibióticos en las raciones de animales, como promotores de crecimiento, y también por el tratamiento indiscriminado de personas y animales por prescripción médica o veterinaria (Casawell et al., 2003). La detección y monitoreo de la multiresistencia de ST y SE es importante para modificar la elección de antibióticos para el tratamiento de salmonelosis y para evaluar el riesgo de expansión de cepas multiresistentes (Yang et al., 2002). Por lo mencionado anteriormente, es importante estudiar los perfiles de resistencia de ST tanto de origen humano como de animales, ya que permitirá una mayor comprensión de la epidemiologia de los clones involucrados (Graziani et al., 2007).

El objetivo de nuestro trabajo fue evaluar la sensibilidad a diferentes antimicrobianos, de uso en medicina humana y veterinaria, de cepas ST aisladas de huevos de consumo humano.

Materiales & Métodos
Cepas bacterianas. Se utilizaron 47 cepas de ST aisladas de pooles de cáscara (2), clara y yema (12), claras (15) y/o yemas (18) de huevos comercializados en supermercados de la provincia de Entre Ríos, Argentina. Como cepa control se utilizó Escherichia coli ATCC 25922.

Análisis de susceptibilidad antimicrobiana. Se utilizó el método de difusión en placa según las recomendaciones del CLSI (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 2010). A partir de una suspensión bacteriana correspondiente al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland, se absorbió con hisopo estéril y fueron sembradas en placas de agar Mueller-Hinton (Difco, EEUU ), e incubadas aeróbicamente a 37ºC por 24hs. Se analizaron 25 antimicrobianos (OXOID, Inglaterra): ceftazidima (CAZ 30µg), cefotaxima (CTX 30µg), cefoxitima (FOX 30µg), cefixima (CFM 5µg), cefalotina (KF 30µg), gentamicina (CN 10µg), estreptomicina (S 300µg), amicacina (AK 30µg), neomicina (N 30µg), kanamicina (K 30µg), acido nalidíxico (NA 30µg), norfloxacina (NOR 10µg), ciprofloxacina (CIP 5µg), enrofloxacina (ENR 5µg), doxiciclina (DO 30µg), tetraciclina (TE 30µg), imipenem (IMP 10µg), ampicilina (AMP 10µg), sulfametoxazol-trimetoprima (SXT 25µg), tigeciclina (TGC 15µg), cloranfenicol (C 30µg), florfenicol (FFC 30µg), fosfomicina (FOS 50µg), colistin sulfato (CT 10µg) y amoxicilina-acido clavulánico (AMC 30µg). Se midió el diámetro del halo de inhibición de crecimiento y la sensibilidad fue determinada según las recomendaciones del CLSI. En base a ello las cepas fueron clasificadas como sensibles, sensibilidad intermedias o resistentes.
Resultados & Discusión
Tabla 1. Sensibilidad de Salmonella Typhimurium frente a diferentes antimicrobianos usados en medicina humana y veterinaria.
Grupos de Antimicrobianos
Antimicrobianos
Porcentajes de cepas Sensibles (S), Intermedias (I) y Resistentes (R)
S
I
R
β-lactámicos
Ampicilina (AMP)
44,7
40,4
14,9
Β-lactámicos /Inhibidores de β-lactamasas
Amoxicilina/Acido clavulánico (AMC)
100,0
0,0
0,0
Quinolonas
Acido nalidixico (NA)
95,7
0,0
4,3
Ciprofloxacina (CIP)
100,0
0,0
0,0
Enrofloxacina (ENR)
87,2
12,8
0,0
Norfloxacina (NOR)
100,0
0,0
0,0
Tetraciclinas
Doxiciclina (DO)
0,0
31,9
68,1
Tetraciclina (TE)
4,3
2,1
93,6
Fenicoles
Cloranfenicol (C)
93,6
0,0
6,4
Florfenicol (FFC)
97,9
2,1
0,0
Aminoglucósidos
Amicacina (AK)
80,9
14,9
4,3
Estreptomicina (S)
0,0
2,1
97,9
Gentamicina (CN)
100,0
0,0
0,0
Kanamicina (K)
34,0
59,6
6,4
Neomicina (N)
4,3
78,7
17,0
Cefalosporinas
Cefalotina (KF)
48,9
42,6
8,5
Cefixima (CFM)
76,6
10,6
12,8
Cefotaxima (CTX)
23,4
51,1
25,5
Cefoxitima (FOX)
87,2
8,5
4,3
Ceftazidima (CAZ)
70,2
21,3
8,5
Carbapenemes
Imipenem (IMP)
100,0
0,0
0,0
Inhibidores de vía del folato
Sulfametoxazol/trimetoprima (SXT)
78,7
19,1
2,1
Glicilciclinas
Tigeciclina (TGC)
97,9
2,1
0,0
Polimixinas
Colistina (CT)
51,1
46,8
2,1
Fosfomicinas
Fosfomicina (FOS)
97,9
2,1
0,0
Las cepas de ST presentaron diferente sensibilidad a los antimicrobianos ensayados (Tabla 1). La resistencia estuvo entre 0% (AMC, NOR, CIP, ENR, FFC, CN, IMP, TGC, FOS) y 97,9% (S). En el grupo de los β-lactámicos y β-lactámicos + inhibidores de β-lactamasas, se observó que el 100 % de las cepas fueron sensibles a AMC sin embargo el 44,7% fueron sensibles AMP. Con respecto a los antimicrobianos del grupo de las quinolonas (NA, NOR, CIP, ENR), la mayoría de las cepas fueron sensibles a uno o mas antibióticos de este grupo. El 100% fueron sensibles a NOR y CIP, ambas quinolonas de 2° generación, mientras que para NA y ENR la sensibilidad fue de 95,7% y 87.2% respectivamente. Para el grupo de las tetraciclinas (DO y TE), se observó un alto patrón de resistencia, de 68.1% para DO y 93,6% para TE. Con respecto a los fenicoles (C y FFC), se observó una sensibilidad mayor al 93%.

En el grupo de los aminoglucósidos, todas las cepas fueron sensibles a CN, mientras que para AK el 80,9% de las bacterias fue sensible. Para N y K, encontramos una sensibilidad menor al 30%. Para S el 97,9% fueron resistentes. En el grupo de las cefalosporinas, se evaluaron cefalosporinas de 1° generación (KF), 2° generación (FOX) y de 3° generación (CAZ, CTX y CFM). La sensibilidad de las cepas a CAZ, CFM y FOX fue del 70.2%, 76.6 y 87,2% % respectivamente. Para CTX se observó un 51,1% de sensibilidad intermedia y un 25,5% de cepas resistentes, mientras que para KF hubo un 48,9% de cepas sensibles y un 42,6% de cepas con comportamiento intermedio. En el grupo de Carbapenemes (IMP) se observó un 100% de cepas sensibles. Los antimicrobianos Inhibidores de la vía del folato (SXT), glicilciclinas (TGC), fosfomicinas (FOS) presentaron una sensibilidad mayor al 78%. En el grupo de las polimixinas (CT) se observó un 51,1% y 46,8% de cepas sensibles e intermedias, respectivamente.

La presencia de multiresistencia a dos o más antibióticos, se observó en el 98% de las cepas ensayadas, siendo las mismas dentro del mismo grupo o distintos grupos de antibióticos, sin embargo el promedio de resistencia fue del 15%, no observándose resistencia cruzada dentro del grupo de las quinolonas y fenicoles (dato no mostrado).

En el grupo de β-lactámicos Ruiz B et al. (2006), evaluaron la susceptibilidad de distintas salmonellas aisladas de granjas de ponedoras comerciales a AMP y AMP/Sulbactam con un 100% de sensibilidad a las cepas. En nuestro trabajo la sensibilidad a AMP fue menor al 50%, aunque para AMC se elevó al 100%. Para el grupo de las quinolonas, Akoachere et al. (2009) y Esaki et al. (2004) informaron una marcada susceptibilidad a este grupo de antimicrobianos de salmonellas aisladas de alimentos para aves y de animales de producción, lo cual concuerda con nuestro resultado. Por otro lado, Ruiz B et al. (2006), observaron una sensibilidad del 100% para TE, a diferencia de los resultados obtenidos en nuestro trabajo. Sin embargo estos autores ensayaron este antibiótico con serovares de Salmonella distinta a ST. Al evaluar el grupo de los fenicoles, nuestros resultados concuerdan con los obtenidos por Ruiz B et al. (2006) para C, mientras que Khan et al. (2000) encontraron que cepas de ST presentaron una alta resistencia a los fenicoles.

Además observaron que cepas resistentes a C lo fueron también para FFC. Al evaluar el grupo de aminoglucósidos Ruiz B et al. (2006) encontraron una sensibilidad del 100% a AK y CN, lo que concuerda con nuestros hallazgos.

Con respecto al grupo de aminoglucósidos, Graziani et al. (2007), encontraron una alta resistencia a S al igual que lo observado en nuestros ensayos. En lo que se refiere a sensibilidad para el grupo de las cefalosporinas, Ruiz B et al. (2006) encontraron una sensibilidad del 100% para CAZ, CTX en salmonella no Typhimurium. En nuestro trabajo ensayamos 5 cefalosporinas, entre ellas CAZ y CTX obteniendo una sensibilidad entre 23.4% (CTX) a 87.2% (FOX).

En el grupo de los carbapenemes, obtuvimos similares resultados que los informados por Ruiz B et al. (2006). Akoachere et al. (2009) describieron alta resistencia a SXT en cepas de ST, lo cual no concuerda con nuestros resultados, ya que observamos una sensibilidad mayor al 78% en las cepas ensayadas para el mismo antimicrobiano.
Conclusiones
Dada la importancia de ST en la salud pública y su multiresistencia a diferentes antibióticos, toda terapia antimicrobiana frente a este agente debe considerar en la misma a CN, NOR, CIP, IMP o AMC. Aunque nuestros resultados indican que la mayoría de los antimicrobianos ensayados mostraron una buena sensibilidad en cepas de ST, no sería recomendable el uso de las tetraciclinas y estreptomicina, ya que se observó una resistencia elevada. La aparición de cepas multiresistentes es de gran importancia ya que nos permite obtener un mayor conocimiento y realizar una mejor elección del agente antimicrobiano a emplear, de manera de evitar fallas en los tratamientos.

Bibliografía
Akoachere J-FTK, Tanih NF, Ndip LM, Ndip RN. 2009. Phenotypic characterization of Salmonella Typhimurium isolates from food-animals and abattoir drains in Buea, Camerron. J. Health Popul. Nutr. 27:612-618.
Casawell M, Friis C, Marco E, McMullin P, Philips I. 2003. The European ban on growth-promoting antibiotics and emerging consequences for human and animal health. J. of Antimicrobial Chemoterapy 52:159-161.
Esaki H, Morioka A, Ishihara K, Kojima A, Shiroki S, Tamura Y, Takahashi T. 2004. Antimicrobial susceptibility of Salmonella isolated from cattle, swine and poultry (2001-2002): report from the Japanese Veterinary Antimicrobial Resistance Monitoring Programme. J. Antimicrob. Chemother. 53:266-270.
Graziani C, Busani L, Dionisi AM, Lucarelli C, Owczarek S, Ricci A, Mancin M, Caprioli A, Luzzi I. 2007. Antimicrobial resistance in Salmonella enterica serovar Typhimurium from human and animal sources in Italy. Vet. Microbiol. 128:414-418.
Khan AA, Nawaz MS, Khan SA, Cerniglia CE. 2000. Detection of multidrug-resistant Salmonella Typhimurium DT 104 by multiplex polymerase chain reaction. Microbiol. Letters 182:355-360.
National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2010. Performance Standards for antimicrobial susceptibility testing; Twentieth Informational Supplement. NCCLS, 30:1-153.
Ruiz B JD, Suárez MC, Uribe C. 2006. Susceptibilidad antimicrobiana in vitro de cepas de Salmonella spp. en granjas de ponedoras comerciales del departamento de Antioquia. Rev. Col. Cienc. Pec. 19:297-305.
Yang SJ, Park KY, Kim SH, No KM, Besser TE, Yoo HS, Kim SH, Lee BK, Park YH. 2002. Antimicrobial resistance in Salmonella enterica serovars Enteritidis and Typhimurium isolated from animals in Korea: comparision of phenotypic and genotypic resistance characterization. Vet. Microbiol. 86:295-301.
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Autores:
Dante Javier Bueno
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
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Mario Soria
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
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