Explorar
Comunidades en español
Anunciar en Engormix

Anticuerpos de yema de huevo en diagnóstico y tratamiento de enfermedades

Aglutinación cruzada de anticuerpos de yema de huevo Anti-Salmonella enteritidis con otras serovariedades de Salmonella enterica

Publicado: 2 de septiembre de 2011
Por: Pablo A. Chacana, Andrés Wigdorovitz (IncuINTA, Instituto de Virología, CICVyA, INTA), Ariel Sugezky (Vetanco S.A) , Alejandra Velilla y Horacio Raúl Terzolo (EEA Balcarce, INTA), Argentina
Resumen

El uso de anticuerpos de yema de huevo, en sus diferentes presentaciones comerciales, se encuentra en constante expansión para el diseño de reactivos de diagnostico y productos para la prevención y tratamiento de distintas enfermedades, entre ellas, la salmonelosis. En este trabajo se evaluó la capacidad aglutinante de huevo en polvo proveniente de gallinas ponedoras hiperinmunizadas con Salmonella Enteritidis (SE) contra otras serovariedades de salmonelas. Los resultados indican que el huevo en polvo presenta actividad aglutinante incluso contra serovariedades no relacionadas antigénicamente con SE.
Palabras Clave: Salmonella, Huevo en polvo, Aglutinación cruzada.

Introducción
Los anticuerpos de yema de huevo (IgY) se han aplicado exitosamente en el diseño de sistemas de diagnóstico y de productos para la prevención y tratamiento de diferentes enfermedades, tanto humanas como veterinarias (Chacana et al., 2004, Schade & Chacana, 2007). Por ejemplo, la Tecnología IgY ha sido exitosamente aplicada en ensayos para el control de diarreas neonatales, caries dentales humanas, úlcera gástrica causada por Helicobacter pylori, enfermedades de los peces, inhibición del desarrollo de Salmonella enterica, etc (Schade et al., 2005).

Salmonella entérica comprende una gran diversidad de serovariedades (mas de 2.000), que según el esquema de Kauffmann-White se clasifican por sus antígenos somáticos y flagelares. Según este esquema, las diferentes serovariedades se clasifican en grupos y subgrupos, en base a la existencia de antígenos comunes (Grimont & Weill, 2007). Por ejemplo, Lee et al. (2002) realizaron un estudio de reacciones cruzadas entre IgY producida contra Salmonella Enteritidis (SE) (fórmula antigénica: 9,12:g:m) y S. Typhimurium (ST) (fórmula antigénica 4,12:i:1,2). Luego de hiperinmunizar a diferentes gallinas ponedoras con ambas bacterias inactivadas, estos investigadores elaboraron huevo en polvo hiperinmune mediante liofilización de la fracción hidrosoluble de la yema del huevo. Mediante pruebas de ELISA específicas para ambas serovariedades, se demostró que los anticuerpos producidos contra SE presentaban reacción cruzada contra ST en un 55,3% y, en forma inversa, las IgY producidas contra ST reaccionaban contra SE en un 42,4%. Además, los autores demostraron que la incubación de SE y ST junto con los anticuerpos disminuyó significativamente el desarrollo de estos microorganismos en medios de cultivo líquidos. Este trabajo demuestra que, a pesar de que SE y ST no presentan alta identidad antigénica según el esquema de Kauffmann y White, comparten otros antígenos y epitopes propios de la especie y que anticuerpos dirigidos contra ellos tienen la capacidad de neutralizar en forma cruzada a las distintas serovariedades. Por otro lado, Terzolo et al. (1998) demostraron la capacidad de los anticuerpos de yema de huevo para aglutinar a Salmonella y su potencialidad para ser utilizadas como alternativa a los anticuerpos producidos en mamíferos para la serotipificación. En base a esto, el objetivo de este trabajo fue la evaluación de la capacidad de aglutinación de huevo en polvo producido contra SE para aglutinar diferentes serovariedades de S. enterica.
Materiales & Métodos

Huevo en polvo
Se utilizó huevo en polvo completo (yema y clara), elaborado a partir de huevos de gallinas ponedoras hiperinmunizadas (huevo en polvo hiperinmune) con una bacterina contra la cepa regional Salmonella Enteritidis INTA 86/360 fagotipo 4 (Sandoval et al., 1989). Además, se utilizó huevo en polvo elaborado a partir de huevos de gallinas no hiperinmunizadas (huevo en polvo control).
Cepas de Salmonella
Se utilizaron diferentes cepas de Salmonella enterica aisladas a a partir de diferentes casos veterinarios. Las serovariedades incluidas fueron: S. Braenderup, S. Typhimurium, S. Gallinarum, S. Infantis, S. Agona, S. Newport y S. Muenster.
Preparación de los antígenos para aglutinación
Las distintas cepas de salmonellas fueron sembradas sobre agar XLDT4 y luego de su incubación a 37ºC durante 24 hs, el crecimiento fue utilizado para inocular caldo infusión Cerebro Corazón, que fue incubado en las mismas condiciones anteriores. El caldo fue inactivado con 0,05% de formalina (v/v) y finalmente se ajustó la concentración bacteriana a 108 bacterias/mL según la turbidez de la escala nefelométrica de Mc. Farland. Los antígenos se colorearon utilizando 0,01% (v/v) de cristal violeta
Determinación del título de anticuerpos
El título de anticuerpos aglutinantes del huevo en polvo contra cada una de los antígenos se determinó mediante microaglutinación en placa de 96 pocillos con fondo en "U". Se realizaron diluciones seriadas en base log2,tanto del huevo en polvo hiperinmune como del huevo en polvo control. El título fue determinado como la inversa de la mayor dilución con capacidad aglutinante.

Resultados & Discusión
En la Tabla 1 se muestran los títulos de anticuerpos aglutinantes presentes en el huevo en polvo control e hiperinmune contra SE. En todos los casos, los títulos aglutinantes del huevo en polvo control no fueron mayores a 40. La existencia de anticuerpos aglutinantes en el huevo obtenido a partir de gallinas no hiperinmunizadas puede deberse tanto a reacciones inespecíficas como a anticuerpos dirigidos contra otros microorganismos que presenten epitopes en común con Salmonella spp. Los títulos de anticuerpos aglutinantes obtenidos en el huevo en polvo anti-SE variaron según las distintas serovariedades. Los mayores títulos se obtuvieron cuando el huevo en polvo se enfrentó a las distintas cepas de S. Enteritidis ensayadas. El huevo en polvo tuvo la capacidad de aglutinar incluso a las serovariedades que no presentan antígenos en común con SE según el esquema de Kauffmann- White (Grimont & Weill, 2007). Por ejemplo, el título contra S. Muenster, S. Branderup y S. Newport fue de 640.
Tabla 1. Títulos de aglutinación de huevo en polvo control e hiperinmune anti-Salmonella Enteritidis contra diferentes serovariedades de Salmonella. El título se indica como la recíproca de la mayor dilución con capacidad aglutinante.
Cepa
Formula antigénica según esquema de Kauffmann-White
Título aglutinante 
Huevo en polvo control
Huevo en polvo anti-SE
S. Enteritidis INTA 86/360
9, 12 :g, m
>20
5120
S. Enteritidis INTA 10/12
9, 12 :g,m
>20
5120
S. Enteritidis Fagotipo 4
9, 12 :g,m
40
5120
S. Typhimurium INTA 09/63
4, 5, 12: i: 1,2
>20
2560
S. Typhimurium INTA 09/67
4, 5, 12: i: 1,2
40
1280
S. Gallinarum INTA 2042
9, 12: -
40
2560
S. Gallinarum INTA 1582
9, 12: -
>20
5120
S. Infantis INTA 08/49
6, 7: r: 1,5
>20
1280
S. Agona INTA 09/52
4, 5, 12: f,g,s: [1,2]
40
2560
S. Newport INTA 09/217
6, 8: e,h: 1,2
40
640
S. Muenster INTA 09/67
3: e,h: 1,5
40
640
S. Braenderup
6, 7: e,h: e,n,z15
>20
640
Conclusiones
El huevo en polvo producido a partir de gallinas hiperinmunizadas con Salmonella Enteritidis presenta capacidad aglutinante tanto contra las cepas de Salmonella incluidas en la vacuna como contra otras serovariedades de Salmonella que no comparten antígenos comunes.
Bibliografía
Chacana PA, Terzolo HR, Gutierrez Calzado E, Schade R. 2004. Tecnología IgY o aplicaciones de los anticuerpos de yema de huevo de gallina. Revista de Medicina Veterinaria 85(5):179-189.
Grimont P & Weill F. 2007. Kauffmann-White Minor scheme. pp.15-109. Antigenic formulae of the Salmonella serovars. Grimont and Weill (Ed.). WHO Collaborating Center for Reference and Research on Salmonella. Paris, France.
Lee EN, Sunwoo HH, Menninen K, Sim JS. 2002. In vitro studies of chicken egg yolk antibody (IgY) against Salmonella Enteritidis and Salmonella Typhimurium. Poultry Science 81(5):632-641.
Sandoval VE, Terzolo HR, Moreira AR, Micheo GL, Eiguer T, Caffer MI, Fronchowsky B. 1989. Paratifosis aviaria causada por Salmonella serovar. Enteritidis en Argentina. Revista Argentina de Producción Animal 9(4):295-308.
Schade R & Chacana PA. 2007. Egg yolk compounds - Livetin fractions. In: Huopalahti R, Lopez-Fandino R, Anton M, Schade R. (Eds.). Bioactive Egg Compounds. Springer, Germany. 298 pags. I.S.B.N.: 978-3-540-37883-9.
Schade R, Gutierrez Calzado E, Sarmiento R, Chacana PA, Porankiewicz-Asplund J, Terzolo, HR. 2005. Chicken egg yolk antibodies (IgY-technology): A review of progress in production and use in research and in human and veterinary medicine. ATLA 33(2):129-154.
Terzolo HR, Sandoval VE, Caffer MI, Terragno R, Alcain A. 1998. Aglutinación de inmunoglobulinas de yema de huevo de gallina (IgY) contra Salmonella enterica serovariedad Enteritidis. Rev. Arg. Microbiol. 30 (2):84-92.
Temas relacionados
Autores:
Pablo Chacana
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
Seguir
Horacio Raúl Terzolo
Seguir
Alejandra Velilla
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
Seguir
Ariel Sugezky
VETANCO SA
Seguir
Andrés Wigdorovitz
Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - INTA
Seguir
Mostrar más
Únete para poder comentar.
Una vez que te unas a Engormix, podrás participar en todos los contenidos y foros.
* Dato obligatorio
¿Quieres comentar sobre otro tema? Crea una nueva publicación para dialogar con expertos de la comunidad.
Crear una publicación
Súmate a Engormix y forma parte de la red social agropecuaria más grande del mundo.
Iniciar sesiónRegistrate