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Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa

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(19689)
(32)

En los 90 las herramientas diagnosticas del tipo serológico que mas frecuentábamos era AGP, HI, en tanto las pruebas de ELISA que eran para ese entonces prohibitivas en su costo, sobre todo para empresas de con poca producción además que no había una gran experiencia de interpretación y manejo de la técnica;  por ello asumo que la  curva de aprendizaje de muchos de nosotros los técnicos fue un poco dilatada y costosa, sin embargo hoy en día la tecnología ha permitido la evolución de las nuevas versiones de los kit extendidos y software de diagnostico incluso  ampliar el rango de enfermedades que se pueden monitorear por este método.  

Este método diagnostico serológico nos permitirá cuantificar la presencia de anticuerpos específicos para determinados agentes infecciosos, con alta sensibilidad, en tiempo corto, económico y comparable en el tiempo, sin embargo no es una prueba determinante y en todo caso es una prueba de diagnostico indirecta, ya que lee los anticuerpos específicos.

Para un adecuado uso de esta técnica diagnostica repasaremos algunas consideraciones básicas para la interpretación serológica para las principales enfermedades que usamos en nuestro medio.

SEROCONVERSION

El contacto de un antígeno con el organismo del ave genera una respuesta inmunológica denominada seroconversión, que se expresa por el incremento de anticuerpos específicos, esta respuesta condicionara que las barras tengan un desplazamiento hacia la derecha" en el histograma

HISTOGRAMA-

Es una representación grafica a través de barras partiendo desde su eje horizontal, cada barra se ubicara en un grupo (0 1 2 3 ...) en tanto en el eje vertical se leerá la cantidad de aves; en el grafico siguiente la barra 1 tiene 8 muestras evaluadas, en la barra 2 se observara 6 aves y la barra 3 se observa 3 aves muestras evaluadas; en este caso la expresión del comportamiento serológico de una de una determinada enfermedad  de un lote a observar.

Cada barra en el histograma, representaran la cantidad de aves con  títulos dentro de un rango determinado,  por ejemplo la barra que esta en el grupo 3 las ocho muestras tendrán una titulación entre 2000 y 2999, es por ello que no es muy importante leer titulo individuales sino como están agrupados. Ver Grafico 1


CANTIDAD

Count (Cantidad).- En el caso del grafico 2;  en el eje vertical que va del 1 al 10 tal como podemos observar, hay 3 barras en la primera está representando 3 muestras en el grupo 1 (eje horizontal), la segunda barra 9 muestras en el grupo 2 y en la tercera barra  8 muestras en el grupo  3. 


Grafico 2 

TITER GRUPO

En la barra horizontal de los grafico anterior podemos observar que los titer group van del 1 hasta el 18, cada grupo tiene un rango de títulos mínimo y titulo máximo y, se presentan en el cuadro 2.

Cuadro 1.- Estos grupos (titer group) y rangos de títulos mínimo máximo, se han establecidos para la interpretación de Newcastle (NDV), Bronquitis (IBV), Gumboro (IBD), Reovirus(REO).

Titer

Titulo

Titulo

Group

Minimo

Maximo

0

0

396

1

397

999

2

1000

1999

3

2000

2999

4

3000

3999

5

4000

4999

6

5000

5999

7

6000

6999

8

7000

7999

9

10000

11999

10

12000

13999

11

14000

15999

12

16000

17999

13

18000

19999

14

20000

21999

15

22000

23999

16

24000

27999

17

28000

31999

18

> 32000

Para el caso del histograma grafico 2:

La primera barra que agrupa a 3 muestras, los títulos de estas muestras están entre 397 y 999.

La segunda barra que agrupa a 9 muestras y están en grupo 2, los títulos están entre 1000 y 1999.

La tercera barra que agrupa a 8 muestras y están en grupo 3, los títulos están entre 2000 y 2999.

La cantidad de grupos y rangos pueden variar depende de la procedencia del kit, En los caso antes observados se trata de IDEXX Laboratories, en tanto que para el caso de Simbiotic solo presentan 14 grupos, y otros rangos, sin embargo el concepto es el mismo, simplemente hay que trabajar con una misma base de datos sea del uno o del otro laboratorio.

Cuadro 2.- Para el caso de Anemia (CAV) los grupos y rangos de títulos mínimo máximo, se han establecidos así.

 

RANGOS CAV

 

Titer

Titulo

Titulo

 

Group

Mínimo

Máximo

 

0

0

    <1000

Negativo

1

1001

2460

 + Protectores

2

2461

5050

+ Protectores

3

5051

8660

+ Protectores

4

>= 8661

 

Alto Protector

 

Grafico 3. Histograma correspondiente a un lote evaluado para anemia infeciosa

Esta es una muestra de reproductoras adecuadamente inmunizadas para CAV, en tanto para progenie seria los adecuado que haya títulos en el grupo 1 ó 2 por lo menos para asegurar la protección correspondiente.

 

IDENTIFICACION DE LA MUESTRA

La Nomenclatura genérica de identificación  B San Carlos G4 43 - IBV, esta es asignada generalmente en código por el software que procesa la muestra, así:  

 B (Broiler) ó R (reproductora)

San Carlos (Nombre de la Granja)

G4 (Numero del galpón),

43 dias  (Edad)

IBV (Infección virus bronquitis)

 

TITULO PROMEDIO GEOMÉTRICO

Titulo Promedio Geométrico ó Geometric Meter Titer (GMT) que viene a ser la raíz      n ésima del producto de n valores de las muestras analizadas, en este caso de los títulos, Ejemplo, la media geométrica de 1, 3 y 9 seria (los valores serian los títulos)

 

La ventaja de este es que es menos sensible a valores extremos vs la media aritmética, por tanto este valor es más relevante que el TITULO PROMEDIO ARITMETICO (MEAN) para la interpretación de resultados en cualquier situación de CV.

TITULO PROMEDIO ARITMETICO (MEAN)

MEAN ó La media aritmética representa la  suma y el promedio de los títulos. Este valor carece de significancia cuando algunas de las muestras tiene títulos que corresponden al grupo 0, así mismo a las muestras que tienen títulos con valores excepcionalmente alto, en todo caso extremos puede hacer variar la apreciación si es que evaluamos el valor medio ó MEAN. En mucho de los casos el criterio es eliminar este valor, ya que también pueden suceder contaminación de las muestras, fallas de las pipetas que agregan los reactivos.   Este valor es relevante siempre y cuando tengamos un CV bajo.

COEFICIENTE DE VARIACIÓN (CV)

El CV es la dispersión de los títulos en el histograma por ejemplo

En el histograma grafico 3 el  CV es igual a 79, lo que nos indica que este lote presenta una alta dispersión de los titulos;  en tanto en el histograma grafico 4 el valor del CV es igual a 29, es decir que las muestras están agrupadas o baja dispersión..

Lo esperable seria que los lotes presenten menor CV posible, pues significa que hubo una respuesta uniforme del lote evaluado. Desde otro ángulo de la evaluación se puede asumir que un CV muy agrupado por ejemplo de 5 ó 10 puede estar significando que hubo una respuesta a un agente viral, por tanto se acompañara con títulos muy altos, y lógicamente con síntomas de la enfermedad. En algunos lotes de reproductoras debidamente inmunizadas también se pueden presentar esta condición.

Grafico 3. Histograma con coeficiente de variación alto  Gráfico 4.  Histograma con coeficiente de variación alto  

Grafico 5. Histograma con coeficiente de variación bajo


  

 

 Una respuesta inmune homogénea a la vacunación muestra por lo general un CV menor de 35-45%. Un CV mayor del 60%  en una parvada indica que en ella hay aves con muy poca o ninguna respuesta, además de aves con respuesta alta o adecuada a la vacunación.

Teóricamente se asume que un CV con menos de 40% es un valor excelente, 40  hasta 60% Bueno, y se obtuviera más de 60% revisar los procesos de vacunación y/ó posibilidad de afección viral.

Otras causas de CV alto podríamos atribuir a que no todas las aves han sido vacunadas adecuadamente, una transferencia de anticuerpos maternos muy desuniforme, exposición tempranera al agente infeccioso, la muestra en proceso de  seroconversión frente a un agente infeccioso.

DENSIDAD ÓPTICA (OD)

OD.- La densidad óptica es la intensidad de color desarrollada entre los anticuerpos, el antígeno, los conjugados y cromógenos de la prueba ELISA y que se mide en un espectrofotómetro del lector de ELISA, siendo la D.O. directamente proporcional al color y a la concentración de anticuerpos en el suero. La OD de los controles positivos y negativos puede variar de placa a placa y las razones pueden ser las siguientes:

Fuente: ELISA TIPS IDEXX 2006

  •  Temperatura del laboratorio era demasiado baja.
  • La solución de lavado fue preparada  o utilizada incorrectamente.
  • El sistema de lavado de placas  tiene  contaminación microbiana o contiene  residuos de otra   formulación de lavado. 
  • Exceso de ciclos de lavado.  
  • Los períodos de la  incubación son  demasiado cortos.
  • El reactivo y las placas están  demasiado fríos.
  • Alguno de los reactivo esta expirado o sean entremezclados de diferentes lotes. 
  • El Conjugado fue mal utilizado o  incorrectamente preparado o se ha deteriorado
  • La placa del análisis leída estaba en la longitud de onda incorrecta, o el lector funcionaba incorrectamente.
  • El control positivo fue diluido (formato indirecto solamente). 
  • El kit ha sido sometido a stress excesivo.
  • Las placas del análisis fueron comprometidas o utilizadas previamente. 

Cuando hacemos la lectura de enfermedades como MG, MS, AI, ILT, CAV, en la cual los títulos o resultados nos preocupan sobremanera, es vital tener en cuenta la lectura de la DO(resaltado en rojo), puesto que muchas veces pasa desapercibido, y es de gran importancia la agudeza que pongamos en su análisis; por ejemplo en el cuadro 4 se puede observar un histograma de un lote de reproductora analizado para MS con 04 muestras negativas, 11 muestras sospechosas y 3 muestras positivas; sin embargo si observamos el  promedio del control positivo corregido observaremos que tiene un valor de 0.551 es decir que sobre este título consideraremos positivo; sin embargo en las 14 muestras entre sospechosas y positivas,  la OD,  ninguno de ellos a sobre pasado el control positivo, por tanto son títulos bajos que pueden corresponder a una vacunación oleosa, incluso algún desafío para otra enfermedad pero que dan lectura positiva, pero en  tanto no han pasado el control positivo corregido, se les considerara negativas. Sin embargo se deben programar un nueva toma de muestra entre 15 y 21 días posteriores para corroborar este estatus sanitario, si la tendencia se mantiene ó disminuye definitivamente es negativo a la serología. 

Grafico 6

 

Grafico 7

En la siguiente serología de la grafica 6, se trata de un lote realmente positivo para MS y en todos los casos superan al control positivo corregido de la densidad óptica (OD)  


 

Es importante tomar atención del título mínimo por razones varias, por ejemplo:

Si hay muchos títulos en 0 podría ser también por fallas de la técnica 'o fallas del kit, que también suele suceder (ver: ELISA TIPS IDEXX 2006).

Si  todos los títulos están en el grupo 0 podría ser el caso de no aplicación de vacunas ó de  no desafío.

Si solo hay algunos títulos en 0 podría darse en el caso de aves inmunosuprimidas, como suele darse en cualquier población.

Reacciones inespecíficas  pueden dar lecturas 0 también.

Cuando hacemos una evaluación serológica comparativas entre lotes, el titulo mínimo puede ser un indicador importante, pues puede ser un indicador de nivel de cobertura frente a los agentes infecciosos evaluados.

RESPUESTA SEROLOGICA BIMODAL

En el caso del grafico 7 se trataría de una respuesta anormal de los títulos, por lo que se podría asumir la posibilidad de un desafío de campo, y tal como ya hemos revisado antes este lote tiene una respuesta serológica con un alto Coeficiente de variación.

Grafico 8


 

REACCION INMUNOLÓGICA FRENTE A UN DESAFIO DE CAMPO EN REPRODUCTORAS
En la grafica 8 observaremos la evaluación de un lote de reproductoras, en una granja donde no se vacunaba contra el virus de bronquitis a las 7, 16, 26, 34, 48 y 60 semanas; y se observo que en la semana 34 algunos indicios de que las barras se desplazan hacia la derecha, en tanto a las 48 y 60 semanas el histograma se distorsiona el coeficiente de variación es alto así mismo los títulos GMT se incrementaron.
Esta es en cierta forma el comportamiento de la respuesta serológica frente a un desafío de campo. 

Grafico 9




PERFIL SEROLOGICO EN REPRODUCTORAS

El siguiente grafico 9 corresponde a  una representación grafica del  nivel de protección de la parvada a través del tiempo.  Los anticuerpos maternos tienen una catabolismo acelerado hasta la 3 semana aproximadamente, luego de ser estimulada por los procesos de vacunación a virus vivo el organismo responderá con una respuesta primaria con elevación de los anticuerpos, en tanto que entre las 4 y 18 semanas terminado el programa de vacunación con oleosas, las aves responderán con una respuesta secundaria, que no es otra cosa que la elevación de los anticuerpos que le darán la protección necesaria durante la época de producción.

Grafico 10



















PERFIL DE LAS RESPUESTAS  SEROLÓGICAS EN POLLOS DE CARNE

En el grafico 9 se bosqueja la respuesta serológica frente a un programa normal de vacunación para  Gumboro y Newcastle en pollos de carne, hay que destacar que no es importante tomar muestras "bajo "una condición de normalidad entre los 7 días  y 28 días pues los títulos tienen un silencio inmunológico, dado específicamente por que el lector ELISA detecta inmunoglobulinas circulantes IgG las mismas que no están presentes aun en cantidades significativas en ese periodo.  

Grafico 11

 

En el grafico 12 se presenta el comportamiento en el histograma de los títulos agrupados una correcta vacunación vía spray, y un caso de una pobre vacunación vía  agua de bebida.

Grafico 12

 

En el grafico 12 se presenta el comportamiento en el histograma de los títulos agrupados una pobre vacunación en la cual en los 2 primeros histogramas demasiados títulos en el grupo 0 y 1 lo que evidencia una mala respuesta frente a un inadecuado método de vacunación. En tanto en los gráficos siguientes se presentan títulos en los perfiles desde el 10 hasta el 18 en ubicaciones dispersas (coeficiente de variación alto), se le estaría atribuyendo a una reacción rodante de una vacuna respiratoria.

 

Grafico 13

LINEAS DE BASE

La línea de base es el resumen promedio  del comportamiento histórico de las mejores lotes productivamente, para la cual estableceremos rangos, de tal manera que si se excediera de estos parámetros, nuestros nuevos lotes evaluados tendremos la necesidad de revisar nuestro programa sanitario

 En resumen calcularemos los títulos normales para cada agente infeccioso, a determinada edad y por agente infeccioso, así mismo determinara si el programa de salud implementado, debe ser ajustado para alcanzar la productividad de parvadas anteriores

Para poder crearlo se clasifica por el tipo agente infeccioso, seleccionando datos de por lo menos 10 parvadas de la misma edad y sometidas a similares programas de vacunación y estas deben estar asociados a los mejores lotes de producción, esto nos permitirá determina si la media de la respuesta de la parvada analizada, difiere de la media de la línea base, la cual como ya sabemos  es el promedio  de los promedios de por lo menos 10 parvadas.

El siguiente cuadro es una referencia general de acuerdo a la experiencia de campo y bajo condiciones de normalidad, sin embargo es importante tener en cuenta que hay otros elementos de juicio que tenemos que evaluar como son las respuestas productivas, digestivas, respiratorias y otros para complementar el análisis y diagnostico final.
 

 

Cuadro 4

Grafico 14 en este cuadro nos sirve de referencia diagnostica en las dos situaciones  con título alto ó bajo, sin embargo la herramienta más poderosa frente a los problemas sanitarios es y seguirá siendo la BIOSEGURIDAD. 

Grafico 14

 

Para el caso LARINGOTRAQUEITIS copio textualmente sus notas del Dr. GUILLERMO ZAVALA del Department of Population Health, University of Georgia, dice:

"Las pruebas serológicas para Laringotraqueitis (ELISA) tienen muy poca utilidad, pues pueden presentarse resultados positivos en lotes no infectados o sin signos clínicos. Además, la prueba ELISA no tiene ningún valor predictivo en cuanto a protección, dado que la inmunidad no depende exclusivamente de la presencia de anticuerpos. Es decir, el titulo de anticuerpos no refleja el nivel de protección. La única circunstancia en la que la prueba de ELISA podría ser de utilidad es cuando existen zonas avícolas en donde no se practica la vacunación y donde esta prueba indica que existen niveles de anticuerpos muy altos. En este último caso la prueba ELISA puede ayudar a orientar el diagnóstico, pero éste nunca debe depender exclusivamente de los resultados de serología. La interpretación de los resultados es muy simple en el sentido de que los resultados positivos indican en todos los casos que el virus de LTI está circulando y está presente en las muestras de campo. La única situación en la que puede generarse confusión es cuando se quiere determinar si la infección es causada por algún virus vacunal o de campo, en cuyo caso es necesario hacer pruebas de secuenciación de nucleótidos y/o pruebas de determinación del Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP, por su sigla en inglés) que permitan diferenciar los virus de campo de los virus vacunales. En forma práctica, la gran mayoría de los virus detectados en el campo están íntimamente relacionados con los virus vacunales. Esto no significa que debe culparse a las vacunas comerciales por la presentación de la enfermedad. Es bien sabido que algunos virus vacunales son capaces de revertir a la virulencia y por ello debe prestarse especial atención a los métodos de vacunación para evitar que las aves mal vacunadas den oportunidad a los virus vacunales para replicarse más allá de lo deseable.

En esta revisión de algunas consideraciones básicas para la interpretación serológica en ELISA, en la mayoría de los gráficos y cuadros corresponden a casos reales y los añadidos de mi experiencia profesional así como también algunas recopilaciones de los manuales IDEXX, SIMBIOTIC y  está orientado principalmente para los nuevos y jóvenes profesionales que muchas veces acuden a consultar acerca de los principios de una adecuada interpretación de serología en ELISA, estoy seguro que han quedado muchos elementos por definir y explicar en todo caso esto es solo el principio, sin embargo consideré oportuno por las razones obvias y sobre todo generar un foro abierto para quien quiera revisar y hacer un recordaris de manera práctica esta técnica.  

Finalmente la interpretación de los análisis de ELISA es una parte de la historia clínica de los lotes, sin embargo es muy importante tener una base de datos en el tiempo para ayudar a una toma de decisiones correctas. Otro aspecto importante es la experiencia del clínico que orientara los requerimientos de serología de acuerdo a su diagnostico presuntivo.  

 
Autor/es
(19689)
(32)
David Miranda Garza
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Monterrey, Nuevo Leon, México
Médico Veterinario Zootecnista Post-grado Produccion Animal ; AVES
Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
18/12/2009 |
DR. CARLOS VAZQUEZ RECIBA UNA CALUROSA FELICITACION POR LA EXCELENTE PRESENTACION , LE QUIERO COMENTAR QUE ES MUY IMPORTANTE ESTABLECER EL STANDARD SEROLOGICO PARA CADA GRANJA COMO USTED ATINADAMENTE RECOMIENDA AL TOMAR 10 LOTES DE CADA GRANJA Y TOMARLO COMO REFERENCIA,ADEMAS DE ESTABLECER LOS ESTUDIOS CON UN SOLO TIPO DE KIT DIAGNOSTICO PARA EVITAR ERRORES EN LA INTERPRETACION AL TENER VARIOS FABRICANTES DE ESTOS KITS. RECORDAR QUE LOS NIVELES ALTOS DE ANTICUERPOS NO GARANTIZAN UNA PROTECCION FRENTE A UN DESAFIO DE CAMPO PERO NOS INDICAN QUE AL MENOS NUESTROS PROGRAMAS DE VACUNACION SE ESTAN REALIZANDO CORRECTAMENTE, UN MUY BUEN COMENTARIO QUE USTED INDICA ES EL DEL CONTROL SANITARIO BAJO UNAS MEDIDAS EFICIENTES DE BIOSEGURIDAD SON MEJORES PARA REDUCIR NUESTROS PROBLEMAS EN GRANJAS.
DE NUEVO MI FELICITACION Y MIS MEJORES DESEOS PARA ESTA NAVIDAD Y EL PROXIMO 2010 PARA USTED Y TODOS LOS COLEGAS FORISTAS.
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
19/12/2009 | Para los Médicos Veterinarios especialistas en Avicultura es cada vez mas difícil dar un diagnóstico Clínico y las pruebas de Laboratorio son herramientas importantes y necesarias para el diagnóstico ,la prueba de Elisa es una de ellas.
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Oscar Vargas
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Catacamas, Olancho, Honduras
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
28/12/2009 | Estimados amigos, buenos dias y gracias a todos por sus excelentes comentarios en relacion a la prueba diagnostica de Elisa , nosotros estamos manejando un grupo de granjas de aves de postura razas ( Hi-line, Suepr Nick.Chick. ) que hacen en conjunto un total, tres cuartos de millon de aves en cinco granjas en el pais, deseamos montar un muestreo serologico para evaluacion de programas de vacunacion para Micoplasma, Bronquitis infecciosa, Newcastle,prinipalmente., La mayoria de los levantes los realizamos en las granjas y no tenemos hasta ahora pruebas de laboratorios de los titulos maternos que traen las pollitas para estas enfermedades, y me encantaria conocer su opinion en relacion a los programas de monitoreo que hay que realizar en aves en produccion.

Gracias nuevamente.
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
07/04/2010 | Buenas tardes doctor... soy estudiante de medina veterinaria y tuve la oportunidad de hacer pruebas para diagudo mucho a entender los diagnostico de enfermedad de Newcastle en ponedoras y pollos de engorde... En primer lugar dejeme felicitarlo por el articulo personalmente me ayudedo a entender màs facilmente la interpretacion de los histogramas de la casa comercial Idexx....Tengo una duda al respecto sobre el diagnostico de newcastle y espero pueda ayudarme.... Actualmente en venezuela no se si es asi para otros paises se realiza la prueba de inhibicion de la hemoaglutinacion (HI) para evaluaer ya sea anticuerpos maternales, Ac vacunales o Desafio de campo.. Tengo entendido que existen kits de ELISA para detecciòn de ac contra newcastle, pero que no eran tan efectivos ni sensibles a la hora de emitir el diagnostico... Què opinion tiene usted al respecto sobre la sensibilidad y especificidad de estas 2 tecnicas diagnostica? cual considera usted mejor?.... segun su experiencia en el area avicola cual plan de vacunacion contra nexcastle considera mejor?? considerando colocar el primer dia de edad la vacuna oleosa..... y ultima pregunta para introducir un programa de vacunacion cre usted que el estudio de 10 perfiles serologicos es suficiente....
Espero pueda responder mis inquietudes y de antemano le doy las Gracias Doctor...
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
07/04/2010 | Estimado Oscar

Las excusas por la tardía respuesta, no me percate de tu comunicación, espero estar a tiempo

En estos casos recomiendo hacer un muestreo a todos los nuevos lotes que ingresan, y de allí establecer una rutina que coincidan en el radio de tiempo de una semana como máximo de TODOS los lotes de diferentes edades y de todas las granjas, inicialmente puedes hacer cada 2 meses hasta que tengas data importante y estés convencido que tu programa de vacuna y la salud de las aves están bien respaldadas, después podrías hacer un muestreo trimestral.

Hay muchos programas de monitoreo que te recomiendan hacer cada 5 semanas por ejemplo, pero esto se hace engorroso si tienes varios lotes y en varias granjas, por ello es mejor sincronizar todas haciendo un despliegue cada 2 meses de todos tus lotes y en diferentes localidades y en un semana previamente programada, a las finales tendrás títulos en las diferentes edades de la vida de cada uno de tus lotes, que es lo que te interesa.

Finalmente en ponedoras es importante hacer monitoreo de Newcastle, Bronquitis, MG, MS, Salmonella.

Saludos y éxitos

Carlos Vasquez.
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
07/04/2010 | Estimada Deisy

Me entusiasmo saber que he contribuido positivamente a la comprensión de los métodos diagnósticos, de verdad que bueno.

En relación a tu pregunta te comento que tanto la prueba de HI y ELISA son de rutina en la nuestros países, las dos son buenas herramientas, lo que es conveniente es mantener una sola de ella, para poder comparar entre lotes, por ejemplo en HI con vacunas oleosa al primer día y 2 vacunas a virus vivo en campo los títulos pueden oscilar entre 16 y 64. A veces las confusión se da cuando muestreamos por decir 20 muestras de las cuales 1 de ellas hasta 2 de ellas tiene un titulo alto 128, esto no necesariamente quiere decir que tengamos desafío de campo, en este caso lo prudente es tomar las muestras 7 días o 10 días después y verificar nuevamente la titulación, si los títulos fuesen altos, y los signos clínicos son propios de un proceso respiratorio severo ya podríamos asumir que hay un desafió de campo, es mas lo correcto sería pasar a un nivel superior y hacer el aislamiento correspondiente, metodología que no es complicada en un laboratorio, es más te podrían decir el índice de patogenicidad del virus que estas afrontando.

Del mismo modo para ELISA es posible que los títulos sean irregulares pero en promedio con el mismo programa de vacunación anterior pueden oscilar entre 1000 y 3500, con algunas muestras con títulos altos y lo mismo que en el caso anterior si hay signos clínicos deberás tomar muestras nuevamente y reevaluar la situación, pero si estas realmente frente a un desafió los títulos son simplemente altos y en esta segunda muestra todos los títulos serán altos entre 5000 a mas por ejemplo.

Finalmente te digo que estas son herramientas de diagnóstico indirecto, es decir que leerán la cantidad de Inmunoglobulinas o anticuerpos contra el virus, sin embargo otras afecciones respiratorias pueden distorsionar ligeramente los resultados, por ello es vital la observación clínica de campo. No puedes desde el laboratorio y con un HI ó ELISA hacer una presunción de enfermedad sin ver los parámetros zootécnicos y en general la salud de las aves. Habrá casos que los títulos son altos y los parámetro productivos son aceptables es posible que realmente hubo un desafió pero tu plan de vacunación esta funcionando.

Bueno en relación a la cantidad de muestras por lote, lo conveniente sería entre 20 y 24 parta que estadísticamente sea representativa.

Para establecer tu línea de base, es conveniente que vayas acumulando datos históricos, y IDEXX tiene en el software una opción para que te informe sobre tu línea de base, que es la determinación de los títulos máximo, mínimos y el promedio de ellos, lo cual va a ser el rango que deberán estar tus títulos como “NORMALES” ojo normales entre comillas, ya que como te repito esto tiene que ver con la salud de las aves y los parámetros zootécnicos.

A propósito Deisy escribí un artículo sobre Newcastle y por cierto en el directorio de engormix lo podrás encontrar, y que puede complementar tus inquietudes

Saludos y éxitos

Carlos Vasquez
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
20/04/2010 | Doctor muchas gracias por la respuesta....
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Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
13/08/2011 | Saludos
Tambien necesito una interpretacion completa sobre Hi de Newcastle.
Gracias
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Fabio
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Cochabamba, Cochabamba, Bolivia
Médico Veterinario Zootecnista
Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
20/09/2014 | Por favor alguien tiene experiencia para interpretar resultados de elisa rango extendido para gumboro en ponedoras y a que edad se recomienda hacer el monitoreo.
Existe la posibilidad de que se manifieste de forma subclinica en este tipo de aves y si se habla de inmunosupresion es parcial o permanente para este virus en la "edad critica entre la 1 semana , 5 semana hasta la involución como organo linfoide.
GRACIAS
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Carlos Vasquez
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Arequipa, Arequipa, Perú
Médico Veterinario
Re: Algunas consideraciones para la interpretación serológica en Elisa
22/09/2014 | Estimado Fabio A tu consulta, hay varios aspectos que deberás tomar en cuenta. En cuanto a Gumboro - ELISA XR los anticuerpos mostraran una mayor sensibilidad a la lectura vs el kit estándar. Los resultados entre otros aspectos, estará principalmente en función al tipo de ave, edad del muestreo, condición del ave, desafío de campo y/ò al programa de vacuna, cada una de uno de estos tendrá implicancias importantes por tanto es importante revisarlos. Para mayor confiabilidad es importante evaluar perspectiva, es decir sobre una base de datos histórico que te permitirá establecer una línea de base y sobre eso emitir un juicio. Una muestra no es significativa para la evaluación que pretendes hacer. Sin embargo bajo una misma circunstancia, “por ejemplo”; un  kit de Elisa estándar los títulos de anticuerpos pueden estar agrupado en los perfiles 2, 3, 4, 5 con un coeficiente de variación de 25; es posible que en el de XR podría estar en los perfiles 4, 5, 6, 7, 8  y un coeficiente de variación más amplio entre 40 y 60. En cuanto a la inmunosupresión en pollitas ponedoras, es posible bajo ciertas circunstancias, que las vacunas para las pollitas estén siendo aplicadas tempranamente, si tenemos en cuenta que el catabolismo en estas es más lento, por tanto el calendario de vacuna no es igual que la de un pollo de carne. Otra circunstancia podría ser alto desafío en el campo, o aplicación temprana de vacunas intermedias fuertes podrían afectar el sistema inmune creando una situación de inmunosupresión que en muchos de los casos son transitorios pero afectan de todas maneras. Saludos y éxitos!!!
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